热处理对海参溶菌酶C端多肽的抑菌活性和结构的影响 Effects of Temperature on the Antibacterial Activity and Structural Change of the C-terminal Polypeptide of the Sea Cucumber Lysozyme.pdfVIP

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2017-09-03 发布于湖北
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Vol.35 高等学校化学学报 No.5 2014年5月 CHEMICALJOURNAL OF CHINESE UNIVERSITIES 1044 ~1050 doi:10.7503/ cjc 热处理对海参溶菌酶C端多肽的抑菌活性和结构的影响武瑶,梁雯婧,李成,商旭,丛丽娜 (大连工业大学生物工程学院,辽宁省发酵工程重点实验室,大连 116034) 摘要实验优化了重组蛋白C端多肽(SjLys-C)的E. coli Rosetta(DE3)pLysS表达系统,将重组质粒pET-32a (+)-SjLys-C转入有助于蛋白二硫键正确折叠的新表达宿主E. ColiRosetta-GamiB(DE3)pLysS 中. SDS 分析表明,重组蛋白SjLys-C在宿主中得到高效可溶表达. 抑菌实验结果表明,重组蛋白SjLys-C具有较高的抑菌活性;经100 ℃处理40 min后,蛋白SjLys-C的抑菌活性提高. 分子动力学(MD)模拟表明,SjLys-C蛋白具有高度的热稳定性,蛋白热处理后未变性,仍维持完整的三级结构. 但在热处理过程中,SjLys-C多肽的氨基酸残基随温度变化发生内部结构的重排. 其中C端区、N端区和活性区域(10 ~20)内氨基酸残基的柔性增加,蛋白整体构象展开,导致被包埋在内部的2个活性位点(Ser18,His48)暴露,并且它们之间的距离缩短;而活性区域(37~47)内氨基酸残基的构象调整,导致区域结构紧凑,使2个活性位点间的距离改变. 关键词海参溶菌酶;重组蛋白SjLys-C;抑菌活性;热处理;分子动力学模拟中图分类号 O641;Q786 文献标志码 A [1] 溶菌酶(Lysozyme,EC3.2.1.17)又称胞壁质酶(Muramidase),在自然界中分布极为广泛 . 它主要通过水解细菌细胞壁肽聚糖中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰葡萄糖胺之间的茁-1,4糖苷键,破坏肽聚糖 [1,2] [2,3] 的支架,导致细胞裂解,从而起到杀菌的作用 . 研究发现,高等动物组织及分泌物、原生动物、 [4,5] 昆虫和微生物中都存在溶菌酶. 其中,卵清溶菌酶是发现最早、研究最多的溶细菌酶 ,广泛应用于食品和医药等行业,但其有限的抗菌谱限制了进一步应用. 近期研究[5~9]发现,水产动物溶菌酶(i型溶菌酶)与卵清溶菌酶(c型溶菌酶)不同,除了具有卵清溶菌酶的优点外,还有更为广泛的抗菌谱,不仅能裂解革兰氏阳性菌,也能裂解革兰氏阴性菌. [9,10] Cong等发现海参溶菌酶具有广谱抗菌活性,尤其对通常引起水产动物严重病害的病原菌弧菌和假单胞菌具有明显的抗菌效果,所以重组海参溶菌酶将会在水生动物的病害防治中替代抗生素类药物在绿色水产养殖中得到广泛关注. 通过对海参溶菌酶基因结构的分析发现,海参溶菌酶(Stichopus japonicus lysozyme)的C端多肽(SjLys-C,成熟肽中的49 ~125 位氨基酸残基)可能编码了异构肽酶活 [9] 3 性 . 重组蛋白SjLys-C截断片段由76个氨基酸残基组成,分子量约为8.59×10 ,分子内有二硫键交 [9] [11]