DNA纳米传感器荧光成像技术.pdfVIP

第30卷，第1期 光谱学与光谱分析 201 0年1月 and January，2010 SpectroscopySpectralAnalysis DNA纳米传感器荧光成像技术 邓楚芸，李佳敏，马万云’ 清华大学物理系原子分子纳米科学教育部重点实验室，北京 100084 摘要把基于量子点的DNA纳米传感器模型应用到ICCD荧光显微成像系统中，利用量子点的星子产率 高、荧光寿命长、激发谱宽而发射谱窄、发射波长可由材料尺寸调谐等特性，以量子点为供体，Cy5(一种小 分子荧光染料)为受体，结合ICCD系统的全内反射荧光成像功能、实时成像功能和双通道成像功能，证实 了DNA纳米传感器可以在溶液中检测到含30个碱基的单链门标DNA片段。实时拍摄了溶液中链霉亲和素 国仓鼠卵巢细胞样品中加入链霉亲和素包被的量子点和Cy5一ssDNA-Biotin进行实时荧光成像，拍摄到链霉 在活细胞内进行DNA(或I州A)片段检测的町行性。 关键词ICCD；荧光共振能最转移；量子点；DNA纳米传感器 中图分类号：TH74文献标识码：A 能，为量子点FRET模型应用于活细胞研究提供了一种新方 引 言 法。 FRET(fluorescenceresonance energytransfer，荧光共振 DNA纳米传感器技术 能镀转移)技术被誉为“光学尺眦“，叮用于测量纳米量级的 微观距离，在牛物医学检测领域具有广泛应用。而最子点因 DNA纳米传感器的结构和工作原理如图1[8]所示：为检 其独特的光学性质(如量子产率高、荧光寿命长、激发谱宽 测有30个碱基数的特定DNA片段(targetDNA)，制作3’端 而发射谱窄，并可通过调褴粒子尺寸来得到不同颜色的荧 修饰有牛物素的捕获探针(captureprobe)和5’端修饰有荧光 光，可用于多色标记等)已成为标记牛物大分子的新探针。 染料Cy5的报告探针(reporterprobe)，它们与待测的DNA 近年来，将其二者结合进行量子点FRET现象的研究形成了 片段碱基瓦补配对。如果样品中存在待测的特定DNA片段， 新的热点f2。]。Zhang等设计出一种基于单量子点的DNA纳 则捕获探针与报告探针将分别与该DNA片段结合形成杂交 DNAnanosen- 米传感器模型(single-quantum-dot-based聚合体(sandwiched sor)【8J，这种传感器克服r鼋子点FRET检测中经常遇到的 接。此时再加入表面经链霉亲和素修饰过的量子点(strepta— 能量转移效率低的问题，灵敏度非常高，引起r广泛的重 vidin-conjugatedQD)，由于生物素与链霉亲和素问高特异性 视【9 19]。这套模型主要采用以毛细管加雪崩二极管为主体的 的结合，杂交聚合体将被量子点捕获并形成纳米传感聚合体 荧光强度检测平台，测量溶液中的DNA(或RNA)片 段(8“DJ，虽然灵敏度很高，但无法对探测目标进行实时成像 与跟踪。为了适应细胞水平的研究，需要有一种既能够实时 成像跟踪、又能保证高灵敏度的检测系统，而ICCD(intensi- fied charge device)荧光最微成像系统便是符合要求 coupled 的一种新型的检测平台。将ICCD系统与DNA纳米传感器 of Fig．1Configurationsill罟Ie 模型结合起来，在成像水平上实现了DNA纳米传感器的功