16 哺乳动物基因工程.ppt

四、高等哺乳动物的基因转移 一、 高等哺乳动物基因工程的基本概念 二、 高等哺乳动物的受体系统 三、 高等哺乳动物的载体系统 四、 高等哺乳动物的基因转移 五、 利用哺乳动物工程细胞生产重组蛋白 （二）哺乳动物细胞的病毒转染法 以病毒DNA为载体可以将外源基因直接转染或与野生型病毒颗粒 共转染特定的受体细胞。这种方法具有定向性好、实验重复性佳、导 入效率高等优点，但也存在一定的缺陷，如目前常用的载体宿主范围 有限，往往无法转染一些具有重要经济价值的家禽和牲畜细胞等。 1.哺乳动物细胞高效表达外源蛋白的基本原理 2.利用哺乳动物工程细胞生产人源化的小鼠抗体 3. 利用哺乳动物工程细胞生产人组织型纤溶酶原激活剂 4. 利用哺乳动物工程细胞生产人凝血因子VIII 哺乳动物细胞高效表达外源蛋白的基本原理 基因扩增是外源基因在哺乳动物细胞内高效稳定表达的一种特殊 方式。氨甲喋呤（MTX）是动物细胞中的关键代谢酶二氢叶酸还原酶 数细胞死亡，但在极少数幸存下来的抗性细胞中，dhfr基因均得以扩 增。这些抗性细胞正是通过增加相关基因的拷贝数、提高关键代谢酶 通过强化基因扩增高效表达外源基因 （DHFR）的特异性抑制剂，细胞培养物经氨甲喋呤处理后，绝大多 的表达水平，从而抵消氨甲喋呤的抑制效应。更重要的是，扩增的区 哺乳动物细胞内的基因扩增现象 域远远大于dhfr基因