分析化学实验：荧光分光光度法测定硫酸奎宁含量.pptVIP

实验二十八 荧光分光光度法测定硫酸奎宁含量 一、实验目的 1．掌握荧光分光光度法的基本原理 2．学会使用F- 4500荧光分光光度计 二、方法原理 利用荧光分析方法，测定能产生荧光的物质含量，对不能产生荧光的物质，可以利用某些具有能发生荧光基团的有机试剂，与非荧光物质形成较纯的荧光化合物，然后进行测定，是一种高灵敏度的分析方法。 定性依据： 激发光光谱 荧光光谱 三、实验内容 （一）硫酸奎宁激发光谱的绘制 用0.05 mol/L硫酸溶液为参比溶液，用10 mg/L的硫酸奎宁溶液作为测定液。 固定荧光波长为443 nm，从300 nm到400 nm，每间隔10 nm测定一次荧光相对强度。以波长为横坐标，荧光相对强度为纵坐标，在坐标纸上绘出激发光谱图，指出最大激发波长λmax为345 nm。 （二）硫酸奎宁荧光光谱的绘制 用10 mg/L的硫酸奎宁溶液作为测定液。 从380 nm到600 nm，每隔20 nm测定一次荧光相对强度。以波长为横坐标，荧光相对强度为纵坐标，在坐标纸上绘出荧光光谱图，指出最大发射波长λmax为445 nm。 （三）直接比较法测定测定硫酸奎宁含量 式中： CX——待测液的浓度； CS—标准液的浓度； FX—待测液的荧光强度 FS—标准液的荧光强度。 * S2 S1 S0 T1 吸 收 发 射 荧 光 发 射 磷 光 系间跨越3 内转换 振动弛豫 能 量 l 2 l 1 l 3 外转换 l ?2 T2 内转换 振动弛豫 定量依据： 当? l c≦0.05时,将括号项近似处理后： F= 2.3 ? I0 ? l c = Kc 定量方法 标准曲线法： 配制一系列标准浓度试样测定荧光强度，绘制标准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强度，在标准曲线上求出浓度. 比较法： 在线性范围内，测定标样和试样的荧光强度，比较. 荧光仪器组成： 激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。 特殊点：有两个单色器，光源与检测器通常成直角。 *