RNA沉默手段分析烟草悬浮细胞中线粒体分裂蛋白NtFISIA／1B功能.pdfVIP

热带亚热带植物学报 2013，21(4)：289-296 Journalof picalandSubtropicalBo RNA沉默手段分析烟草悬浮细胞 中线粒体分裂 蛋 白NtFIS1A／1B功能 刘岩厚，赵忠芳 (南开大学分子生物研究所，天津 300071) 摘要：为了解烟草悬浮细胞中的线粒体分裂蛋白的功能，将拟南芥(Arabidopsisthaliana)的线粒体分裂复合体成员FIS1A和FIS1B 在烟草(Nicotianatabacum)表达序列数据库中进行序列比对，鉴定到烟草中的同源基因NtFIS1A和NtFIS1B(NtFIS1A／1B)。以 烟草悬浮细胞为材料，通过RNA干扰和人工microRNA干扰技术抑制NtF1S1A／1B的表达 ，RT-PCR分析结果表明，RNA沉 默细胞系中NtFIS1A／1B的转录受到抑制。观察RNA沉默细胞系中的线粒体形态可见，当NtF1S1A／1B的表达被抑制后，单个 线粒体的平均面积显著增加。这些表明NtFIS1A／1B参与了烟草悬浮细胞中线粒体分裂的调控 ，有助于了解烟草中线粒体的形 态调控 。 关键词 ：NtFIS1A／1B；人工microRNA干扰技术；线粒体分裂；烟草；悬浮细胞 doi：10．3969~．issn．1005—3395．2013．04．001 FunctionalValidationofM itochondrialFissionProteins，NtFIS1A／1B，in Nicotianatabacum B‘Y一2’SuspensionCellsUsingRNA Interference LIUYan．hou，ZHAOZhong．fang (InstituteofMolecularBiology，NankaiUniversity，Tianjin300071，China) Abstract：Theaim wastounderstandthefunctionofmitochondrialfissionproteins．Tw0homologues．NtFIS1A andNtFIS1B．wereidentifiedbysearchingtobacco(Nicotianatabacum)ESTdatabasewithmitochondira1fission memberofFIS1A andFIS、B nArabidopsis．Expression NtFIs1A}lB ntobacco B‘Y-2 suspensioncellswere inhibitedbyusingRNA interferenceandartificialmicroRNA interference．TheI PCR resultsshowedthatthe transcriptionofNtFIS1A／1BwereknockdowninrelatedRNAicelllines．Thereafter,mitochondrialmorphologyin RNAkn ockdowncelllineswasanalyzed．Theaverageareaofsinglemitochondriasignificantlyincreased．Itwas concludedthatNtFIS1A／lBparticipatedinmitochonrdia1fissionin B‘Y-2’suspensioncells．Itwouldcontributeto understandmorphologicalregulationofmitochondriaintobaccosuspensioncells． Keywords：NtFIS1 ／1B；ArtificialmicroRNAinterference；Mitochondrialfission；，fcotianatabacum；Suspensioncell 线粒体处于频繁的分裂与融合过程，是高度动 定到参与线粒体融合调控的蛋 白 。近年来，有 态的细胞器，其形态可呈点状、香肠状或管状[1-2]。 关植物线粒体分裂调控的研究取得很大进展。在 在动物和酵母中，线粒体分裂、融合调控的机制已 拟南芥A(rabidopsisthaliana)@，鉴定到3类参与 经得到了广泛深入 的研 。在植物 中，尚未鉴 线粒体分裂调控的蛋 白，分别是 (1)线粒体分裂 收稿 日期：2012—12-07 接受 日期：2013—03-29 基金项 目：