泰山土壤宏基因组DNA中耐热_半乳糖苷酶基因的克隆_表达及性质.pdfVIP

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2017-09-03 发布于重庆
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泰山土壤宏基因组DNA中耐热_半乳糖苷酶基因的克隆_表达及性质.pdf

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微生物学通报 NOV 20, 2008, 35(11): 1686~1690 Microbiology © 2008 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 研究报告 DNA β- 泰山土壤宏基因组中耐热半乳糖苷酶基因的克隆、表达及性质 * 魏萍宋文刚郝岗平 ( 271000) 摘要: 从泰山土壤宏基因组文库中发现可能的β-半乳糖苷酶基因 pwtsA , 将其克隆到表达载体 pET30a, 转化E. coli BL21(DE3) 。工程菌在IPTG 诱导下高效表达可溶性的重组蛋白PWTSA, 分子量为与预期大小一致。能够水解产生硝基酚酶活力为确 57 kD, PWTSA ONPG o- , 13.6 U/mg, 证了重组蛋白为β-半乳糖苷酶。PWTSA 的最适反应温度在85°C ~95°C 之间, 最适pH 值为6.5, 对 90°C 左右的高温有很好的耐受力。在标准反应条件下, 酶作用于底物 ONPG 的米氏常数 Km 为 0.83 mmol/L 。关键词: β 半乳糖苷酶宏基因组基因表达 - , , pwtsA , Clone, Expression and Characterization of the Thermostable β-Galactosidase from Soil Metagenomic DNA of Taishan Mountain * WEI Ping SONG Wen-Gang HAO Gang-Ping (Department of Basic Medicine, Taishan Medical University, Tai’an 271000) Abstract: A possible β-Galactosidase gene (pwtsA ) was discovered from soil metagenomic DNA of Taishan Mountain. PwtsA gene was inserted into the expression vector pET30a and transferred into E. coli BL21(DE3). Recombinant protein PWTSA was expressed as a soluble form at high level through IPTG induction, with