高质量植物基因组DNA的提取.pdfVIP

植物生理学通讯第42卷第2期，2006年4月 311 高质量植物基因组DNA的提取 黄晓丹1张云贵2应铁进1’+ 1浙江大学生物系统工程与食品科学学院，杭州310029；2重庆市果树研究所，重庆402260 Extractionof PlantGenome HighQuality DNA HUANGXiao．Danl，ZHANG、mn．Gui2，YING11e．Jinl，+ l nndFood FmttResenrch College对Bio蹄stemEng№e咖g Science．Z}leji馓gUnivers碲，HⅡngz}10u3l0029，Chi，m：2Cllo鸭qing 觑sf打“溉I：mDng留f，l暑4D226n(流f，h口 提要文章就实验材料处理，细胞裂解方法的选择以及蛋白质、次生物质和RNA的去除等5个方面对提高植物基因组DNA 的提取质量作了介绍。 关键词植物基因组DNA提取；细胞裂解；蛋白质去除；次生物质去除；RNA去除 植物基因组的DNA提取一般须经历破碎细胞 的生化性质来选用何种部位为材料。一般都取植 壁、裂解细胞膜、除去多糖和多酚等次生物质、 物的嫩叶进行实验，而一些衰老的叶片则可以先 变性分离蛋白质、沉淀核酸、去除RNA和浓缩在4℃的黑暗中饥饿l以d，以消耗掉淀粉和其它 DNA等几个步骤。植物DNA的提取方法基本上是 多糖类物质(邹喻萍等2001)。除叶片外，植物的 成熟的，但对不同的植物来说，由于各自的生物 另外一些部位有时也可以成为较好的试验材料。 化学成分和结构不同，在具体操作中存在较大的 差异。例如，巩艳红和刘军(2003)曾指出，不同 的SDs法和CTAB法从银杏和太白红杉的愈伤组织 植物和植物自身的不同部位都有其各自的特点， 中提取基因组DNA，检测结果表明对于这两种方 有的组织木质化程度高，有的细胞壁较厚，而有 法来说，这两个物种的愈伤组织也是较好的试 的含酚类物质多，有的则易于降解等，很难用一 材。 种方法来提取不同植物的DNA。所以，应针对 为了得到高质量的基因组DNA，应采用正确 植物的不同之处，选用提取DNA的方法并进行探 的保存方法使得样品材料尽量不要受到机械损伤和 索和改进。彭锐等(2003)在研究中发现，同一种不被氧化褐变，DNA不为内源核酸酶催化降解 方法提取不同种石斛植物的DNA，稳定性较差。 等。常用的保存方法有低温保存和脱水干燥保存 Hong等(1997)也指出，红藻和褐藻含有的糖类物2种。据报道，用这2种方法保存的材料所提取 质的溶液有极高的黏性，而且不同种藻类、同一 的DNA与新鲜叶片中提取的DNA基本上没有差 株藻的不同部位或同一种藻在不同时间段的细胞壁 异。黄建安等(2003)报道，以硅胶脱水干燥法保 组成都显示出不同的特性，所以，提取藻类的 存的样品所提取的DNA，其质量与新鲜样品和以 DNA即应根据这些具体的生物化学特性作相应的 低温保存的样品所提取的DNA基本上一致。杨清 调整。 辉等(2001)在鉴定狼尾草属植物的杂交后代实验 本文简要介绍有关各种植物的基因组DNA提 中，将嫩叶先于液氮中速冻并保存于一70℃下， 取方法的一些探索和改进情况。 从这样处理的叶片中提取的DNA也适用于RAPD l实验材料的处理 分析。但保存的时间有一定的限制。候义龙等 实验材料的处理包括2个方面：一为实验材 (2003)取苔藓植物的新鲜样品和干燥保存的样品用 料的选择；二为实验材料的保存和预处理。 几种方法提取DNA，并对结果进行比较后发现， 总体上讲，在材料的选取上，应尽量采用植 物的幼嫩部位，但仍应根据实