芒果畸形病的巢式PCR检测.pdfVIP

162 广东农业科学 2012年第22期 芒果畸形病的巢式PCR检测 贾 静 ，蒲金基 ，吕延超 ，占 魏 ，王 芳。，谢艺贤 (1．海南大学环境与植物保护学院，海南 海 1：3570228；2．中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 ，海南 儋州 571737) 摘 要：建立了检测芒果畸形病的有效方法。利用Fusariumprolfieratum的钙调蛋白基因序列设计外侧引物PRO1／PR02和内 侧引物 01／02，采用引物PR01P／RO2可以从芒果畸形病病原菌基因组中扩增出527bp的特异性基因片段 ，采用引物 01／02可获 得477bp的基因片段。巢式PCR的检测灵敏度达 5×10 ng／IxL，是常规PCR的 100倍。此法具有 良好的特异性和检测灵敏度 ，为 芒果畸形病的早期诊断和及时有效的防治提供技术方法和理论依据。 关键词：芒果畸形病：巢式 PCR：检测 中图分类号：$667．7 文献标识码：A 文章编号 ：1004—874X(2012)22—0162—03 Detectionofmangomalformationdiseasebynested-PCR JIAJing，PUJin-ji，LVYan-chao，ZHANWei，WANGFang，XIEYi—xian (1．EnvironmentandPlantProtectionCollege，HainanUniversity,Haikou570228，China； 2．EnvironmentandPlantProtectionInstitute，ChineseAcademyofTropicalAgriculturalSciences，Danzhou571737，China) Abstract：Thestudywastoestablish aneffectivedetectiontechniqueformnagomalformation disease．Theouterpairofprimers PRO1P／RO2nadtheinnerpairofprimersOl／O2weredesigned，accordingtothecalmodulingenesequencesofFusariumproliferatum． Theresultsshowedthata527一bp specificgenerfagmentwasobtainedbyPRO1／PRO2．and477-bpwasamplifiedbyO1／O2．The sensitivityofnested-PCRwasas highastothe5x10 ng／~L．whichwas100timeshigherthanthesensitivityofroutinePCR．Nested- PCRWaSahihg specificityandsensitivitytothedisease，thetechniquenadtheorywouldbeprovidedofrearlydiagnosisandpreventive trealm【ent． Keywords：mangomalformation；nested—PCR；detection 芒果畸形病(mangomalformationdisease)是世界范围 呈现盘状 ，花数明显增多，花轴变短 、变粗，小花簇拥在一 的芒果重要病害。1891年印度首次发现芒果畸形病[1]，目 起 ，最后焦枯死亡 ，且不育花数 目增加 ，雄蕊发育能力变 前该病害在世界各大芒果产区均有发生。而在我国，该病 差。畸形的花序几乎不能坐果，即使结果，果实也不能正常 主要发生在云南元谋 、元江 、华坪和四川攀枝花 ，并确定 发育而败育。某些严重地区因芒果畸形病所致的经济损失 发 生在 我 国的芒果 病 原 菌 的 F