氧化型二硫苏糖醇对兔肌肌酸激酶的构象和活性的影响.pdfVIP

浙 江 大 学 学 报(理学版) 第35卷第1期 ialofZhejiangUniversity(ScienceEdition) Vol.35No.1 2008年 I月 /sci Jan.2008 氧化型二硫苏糖醇对兔肌肌酸激酶的构象和活性的影响 马 勇，李海龙，史 锋 (浙江大学生命科学学院，浙江杭州310058) 摘 要:采用利用内源荧光、1一苯氛基茶-8-磺酸(ANS)荧光、酶活性的测定以及动力学分析等手段，研究肌酸激酶 在氧化型的二硫基苏糖醉(DTT)溶液中的结构与活性的变化.结果表明:随着氧化型DTT浓度的增加，肌酸激酶 的活性逐渐丧失，直至完全失活，并伴随着构象的变化.肌酸激酶起初微小的结构变化就会导致酶活性的迅速丧 失，而且其的失活先于明显可测的整体构象变化，酶分子的活性部位处于柔性区域内.另外，随着氧化型DTT浓度 的提高，肌酸激酶的内源荧光发射峰位明显地红移，外源ANS荧光强度显著增强，即酶分子的疏水面加大，该结果 暗示了酶蛋白的构象发生了改变.动力学分析表明，氧化型DTT对肌酸激酶的氧化过程是一个慢的可逆抑制过 程，其反应的表观速率常数A的大小与氧化型DTT的浓度无关，因此是非络合型的. 关 键 词:肌酸激酶;氧化型二硫苏糖醉;活性;构象变化 中图分类号:Q51 文献标识码:A 文章编号:1008一9497(2008)01一092一04 MAYong,LIHai-long,SHIFeng(CollegeofLifeSciences，ZhejiangUniversity，Hangzhou310058，China) Effectofoxidizeddithiothreitolontheconformationandactivityofrabbitmusclecreatinekinase.JournalofZhejiang University(ScienceEdition)，2008,35(l):92-95 Abstract:Theinactivationofcreatinekinase(CK)invariousconcentrationsofoxidizeddithiothreitolhasbeeninves- tigatedbyfollowingthemethodsofintrinsicfluorescence,ANSbinding,activityassayandkineticanalysis.There- sultsshowedthattheincreaseoftheconcentrationofoxidizedDTTleadstothelosingoftheactivityofCK,aswell astheconformationalchange.TheinactivationoccurredbeforenoticeableconformationalchangeduringCKoxidiza- tion,whichprovedthattheactivesitesoftheenzymedisplaymoreconformationalflexibility.Inaddition,thein- creasingconcentrationofoxidizedDTTresultsinasignificantredshiftoftheemissionmaximumandanobviousin- creaseofANS,whichindicatedthattheremarkablechangesoftheconformationofCK.Kineticstudyshowedthat theoxidizationoftheenzymebyoxidizedDTTisaslowreversibleinhibition,theapparentrateconstantAisinde- pendentofthecon