MiR-134通过靶向调节KRAS抑制786-0肾透明细胞癌细胞上皮间质转化过程.pdfVIP

现代泌尿外科杂志 2014年 6月第 19卷第 6期 393 · 基础 研 究 · MiR-134通过靶向调节KRAS抑制 786—0肾透明细胞癌细胞上皮问质转 化过程 鲍美玲 ，钱 健 ，张少波 ，李 双 ，张 磊 ，赵睿哲，秦 超 ，邵鹏飞，殷长军 (南京医科大学第一附属医院泌尿外科 ，江苏南京 210029) M iR-—134inhibitsepithelial-_to-。mesenchymaltransition bytargetingKRAS in786--0 renalcellcarcinoma cell BAOMei—ling，QIAN Jian，ZHANGShao—bo，LIShuang，ZHANG Lei，ZHAO Rui—zhe，QIN Chao，SHAO Peng—fei。YIN Chang-jun (DepartmentofUrology，theFirstAffiliatedHospitalofNanjingMedicalUniversity，Nanjing210029，China) ABSTRACT：Objective ToinvestigatetheexpressionofmiR．134inhumanrenalcellcarcinoma(RCC)andtoexploreits functionin786—0RCCcells．Methods Rea1．timePCRwasusedtoanalyzetheexpressionofrniR．134inhumanRCCsamples and786—0cells．Woundhealingassaywascarriedouttodetecttheabilityofmigration intransfected786—0cells；theabilityof invasionwasdetectedbytranswellinvasionassay．W esternblotwasadoptedto identifythepotentialsignalingpathwaysandthe alterationsofthemarkersinepithelial-to—mesenchymaltransition (EMT)processwhichaffectedRCC metastasisbym iR一134． A luciferasereporterassaywasperformedtoconfirm whetherKRASwasadirecttargetofmiR．134．Results MiR一134was founddownregulatedinRCC samplesand786—0RCC cells(P O．01)．OVerexpressionofmiR-134suppressedmigration (P 0．05)andinvasion (PO．01)byblockingEMT in786-0cells．KRASwasidentifiedasanoveltargetofmiR一134andmiR-134 mightactasatumorsuppressorviaKRAS-relatedMAPK／ERKpathwaysignaling．Conclusions MiR一134wasdownregulated inRCC andcould inhibitEM T bytargetingKRAS in 786—0 cells． KEY WoRDS：miR．134；microRNA；epithelia1．to．mesenchymaltransition；KRAS；renalcellcarcinoma 摘要 ：目的 探索 miR一134在 。肾癌组织 中的表达并研究其对 肾透 明细胞癌细胞 786—0上皮间质转化 的影响。方法 采用逆转 录一聚合酶链反应(R PcR)检测 miR一134在 2O对 肾癌组织和 786—0细胞 中的表达情况 ；miR一134模拟物转染 786—0后 ，划痕实 验和 Transwell实验分别检测肾癌细胞迁移和侵袭能力的改变情况 ，Westernblot检测细胞 中靶蛋 白KRAs及其相关信号通路 蛋 白表达情况 ；双荧光素酶报告基 因检测 miR-134与 KRAS3，_UTR结合情况。结果 MiR一134在 2O对 肾癌组织和 786—0细胞 中明显低表达(P％O．01)；miR一134模拟物转染后能够抑制肿瘤细胞侵袭 (PO．O1)和迁移的能力 (PO．05)