猪细小病毒VP2蛋白N端甘氨酸富集区的缺失对病毒样颗粒形成及免疫原性的影响.pdfVIP

生 物 工程 学报 ChinJBiotech2011，December25；27(12)：1729—1741 journaJs．im．ac．cn ChineseJournalofBiotechnology ISSN 1000—3061 cjb@im．ac．ca @2011CJB。Allrightsreserved． 猪细小病毒VP2蛋白N端甘氨酸富集区的缺失对病毒 样颗粒形成及免疫原性的影响 陈弟诗1郭万柱 ，陈杨 ，徐志文 ，李雯 ，任玉鹏1，王小玉 1四川农业大学 动物生物技术中心，雅安 625014 2四川省畜牧科学研究院，成都 610066 摘 要：猪细小病毒 (PPV)VP2蛋白N端连续 9个甘氨酸富集的编码区是VP3蛋白的切割位点，常规PCR扩增容易 导致该区段的缺失，为研究该缺失对 PPV病毒样颗粒 (VLPs)的影响，探索VP2病毒样颗粒上适合外源基因插入的位 点，构建了该区段缺失的VP2的真核表达载体 pCI．AVP2，并以完整VP2作为对照，采用脂质体介导法转染Vero细胞， 通过生物信息学技术、SDS．PAGE、Westernblotting、间接免疫荧光以及正染和免疫电镜对表达产物进行分析观察；进 一 步将重组质粒以核酸疫苗的方式直接肌注免疫小鼠，采用间接 ELISA试验、淋 巴细胞增殖试验和 T细胞亚群流式细 胞技术，分析免疫小鼠的体液和细胞免疫应答 。结果显示，缺失AVP2和完整VP2在Vero细胞中均能 自我装配成 VLPs， 并具有与完整病毒粒子类似血凝性，pCI．AVP2和 pCI．VP2均可诱导小鼠产生较强的特异性体液免疫应答和 良好的细 胞免疫应答。结果表明，甘氨酸富集区的缺失不影响VP2病毒样颗粒的装配和免疫原性，△VP2同样可进行PPVVLPs 疫苗和抗原转运载体的研制，为 VLPs载体改造和修饰位点的探索提供 了新方向，为 VP2基 因结构与蛋白质功能的关 系提供 了新的理论依据。 关键词：猪细小病毒，VP2，甘氨酸富集区，缺失，病毒样颗粒 EffectoftheGlycine-richregiondeletedPPV VP2to theVLPs DishiChen ，WanzhuGuo ，YangChen，ZhiwenXu ，WenLi，YupengRen ，andXiaoyuWang 1AnimalBiotechnologyCenter,SichuanAgriculturalUniversity，Yaan625014，China 2SichuanAcademyforAnimalScienes，Chengdu610066，China Abstract：TheN-terminalofporcineparvovims(PPV)viralprotein2(W E)linksaglycine-richdomainwhichisacleavagesite ofPPVVP3．Inordertoconfn-mthathteglycine-richdomainwasessentialforhteself-assemblingofvirus-likeparticles(VLPs)．The VP2genewiht glycine-richdomaindeletedandhtecompleteVP2genewereinsertedtoenkaryotieexpressionvectorpCI．neeand Received：January10，2011；Accepted：August5，2011 Supportedby：ProgramforChangjiangScholarsandInnovativeResearchTeaminUniversity(PCSIRT)(No．IRT0555) Correspondingauthor：WanzhuGuo．E—mail：wzguo@126．corn 教育部长江学者和创新团队发展计划 (N0．IRT0555)资助。 1730 lSSN1000—3061 CN11-1998／Q ChinJBiotech December25．2011 Vo1．27 No．12 werenamedpCI一△VP2andpCI—VP2．Then，pCI—AVP2，pCI-VP2andpCI—neoweretransferredinto