反相液相色谱在多肽及蛋白质分离分析中的应用.pdfVIP

维普资讯 盔 型堂· 2006年第12期 133 反相液相色谱在多肽及蛋白质 分离分析中的应用 耿 娟 ，王艳玲 ，陈丽颖，胡广超 (河南农业大学牧医工程学院，河南 郑州 450002) 摘 要：反相液相色谱巾于具有分辨宰高、罩复性好 、回收牢高等优点，在多肽及蛋白质研究领域中得到_广广泛的应 。 简要介绍了反相液相色谱及其分离机理 ，以及在多肽和蛋白质研究中分离纯化、肽图分析等方面的应用。 关键词：反相液相色谱；多肽；蛋白质；分离纯化 中图分类号：$657．72 文献标识码：A 文章编号：l()04 色谱法是现代分离分析的…种重要方法，广泛地 它相对臆的是正相液相色潜或极性相液相色谱(nor— 应用于诸多领域，如石油化工、有机合成、生物化学(包 mal—phaseliquidchromatography，NPLC)，如硅胶、氧 括畜禽疫病诊断的生物标志物和治疗药靶的选择、新 化铝或离子交换等极性介质为固定相的色谱，其中流 型兽药的开发等)、医药卫生(包括药物代谢机理研究、 动相的极性低于同定相。由于RPLC固相载体的疏水 生理与病理关系研究和疫苗筛选等) 至空间探索等 性，它 以根据流动相中被分离物质分子疏水性的不 无不运用色谱技术以解决各种分离分析问题。20世 同而发生强弱不同的相互作用，从而使不同分子在反 纪80年代以来，随着生命科学研究的不断深入，用于 相柱巾彼此分离。疏水性较弱的样品分子和固定相间 多肽及蛋门质分离纯化的色谱方法得到了快速发展。 的相互作用较弱，因此较快流出；反之，疏水性相对较 在生物技术制备蛋 白质的多极纯化过程中，液相色谱 强的分子和固定相问存在较强的相互作用，在柱内保 被指定为 “必需步骤”。其中，反相液相色谱由于具有 留时间相对较长，因此较慢流出_lJ。早在 20世纪 50 其他色谱方法不nJ比拟的优势，正越来与越受到人fj『 年代，RPLC就已应用于许多有机小分子的分离和分 的关注。它能有效地分离各种多肽混合物，特别适用 析，8()年代后逐步应用于牛物大分子如蛋白质、多肽、 于分子量不大的蛋 白质和多肽物质的分离、纯化和箍 核酸的鉴定，并用于制备规模的分离_2J。 定，在蛋 白质及多肽研究中已得到了广泛的应用。 RPLC与其他色谱方法相比具有分辨率和回收率 近年来，随着基因组和蛋白质组计划的实施 ，对不 高、重复性好、操作简便等优势。由于RPLC可使用挥 同蛋 白质的快速分析、定性以及定量的需求更大。反 发性体系如水溶二三氟乙酸 (TFA)、乙腈 (ACN)等，纯 相液相色谱以其快速简便、灵敏度高、重复性好、分辨 化产物不必进行脱盐，因此大大简化了操作步骤。另 率高等优势受到人们的重视，已成为一种常备的不n』 外，在其他模式的色谱中，保留时间主要决定于天然蛋 缺少的分析手段，并应用于多肽药物的分离。反相液 白质分子表面的某些基团与固定相配基间的相互作 相色谱 各种质谱技术的结合也已成为蛋白质结构分 用。而在 RPLC中，蛋 白质分子通过色谱柱时会发生 析的重要手段和发展方向。 或多或少的去折叠，内部某些疏水残基暴露并与固定 相相互作用，从而表现出与其他色谱及 电泳方法不同 1 反相液相色谱的分离机理 的选择性 ，提供其他方法不能提供的信息，这成为 反相液相色谱 (reverse phaseliquidchromato RPLC在蛋 白质及多肽分离分析 中的又一有利因 graphy，RPLC)是 目前液相色谱分离中使用最为广泛 素l33_。因此，RPLC已成为 曰前广泛使用的一种分离 的一种模式，其特点是固定相的极性比流动相弱。