T—DNA介导的基因诱捕技术及其在植物功能基因组学研究中的应用.pdfVIP

维普资讯 植物学通报 ChineseBulletinofBotany 2008，25(1)：112-120，www．chinbullbotany．com - 专题介绍- T—DNA介导的基因诱捕技术及其在植物功能 基 因组学研究中的应用 杨珍珍，李萍，王崇英。 兰州大学生命科学学院，细胞生物学研究所，兰州 730000 摘要 T-DNA介导的基因诱捕技术是近年来发展起来的鉴定和分离基因的方法。在拟南芥和水稻基因组测序已经完成的今 天，该技术将在两者基因功能的研究中扮演举足轻重的角色。本文就T—DNA介导的基因诱捕系统、基因克隆和突变体库构建 的研究进展及其在植物功能基因组学上的应用等内容进行了综述，并讨论了该技术应用中的一些问题。 关键词 功能分析，基因鉴定，基因诱捕，突变体库，T．DNA 杨珍珍，李萍，王崇英 (2008)．T-DNA介导的基因诱捕技术及其在植物功能基因组学研究中的应用．植物学通报 25，112—120． 随着拟南芥和水稻基因组测序工作的完成，功能基 随着新技术新方法的不断发展，分析鉴定基因功能 因组学成为生物科学当前的研究热点。功能基因组学 的方法越来越多，但最直接最有效的方法是构建饱和的 的主要研究内容包括基因的识别、鉴定和克隆，基因结 基因突变群体，通过突变体分析鉴定基因功能。因此突 构、表达调控、功能分析以及基因相互作用等。近些 变群体的构建是功能基因组学的基础。随着农杆菌介 年来，利用转座子和T-DNA作为转化载体的基因诱捕技 导的植物转基因技术的不断完善。通过创造大量的T． 术为植物基因分离 、鉴定和功能分析的研究提供了强 DNA独立转化子来建立T-DNA突变体库的方法 已成 有力的工具。T-DNA介导的基因诱捕技术是以T．DNA 为快速构建插入突变体库的主要方法 。至今已构建了 作为转化载体，对其进行适当修改后整合报告基因，通过 225000多个拟南芥T-DNA插入突变体，获得了360 报告基因的表达来研究 目的基因表达并进而分离、鉴 000个T-DNA插入位点序列，这几乎可以代表拟南芥 定基因的一门遗传学技术。其基本原理是将含有已知 的整个基因组 (LiandZhang，2006)。同样，科学家 DNA序列的T-DNA载体通过转化插入到受体基因组中。 们构建了200000个水稻T-DNA插入系，这些突变体 使插入位点基因的功能缺失或获得从而造成突变，并在 库 已经 比较大，可以从中以90％的几率找到一个特定 被诱捕序列启动子的控制下表达插入的报告基因。以鉴 的基因(AnandLee，2005)。现在利用T-DNA突变 定可见或非可见的突变。T-DNA不仅可作为诱变剂产 体库分离和鉴定基因功能的报道越来越多，说明其在植 生大量突变体，而且转化载体中的报告基因还可作为克 物功能基因组学中的应用潜力很大。目前拟南芥和水 隆整合位点内源基因的标签。分离和鉴定突变体相关基 稻等植物的基因组测序 已经完成，人们正想尽办法将这 因。到 目前为止。通过基因诱捕 已经发现了很多新基 庞大的新遗传信息与基因功能联系起来 。为此本文将 因。在拟南芥已经克隆的620多个有表型的突变体基 主要介绍T-DNA介导的基因诱捕技术在植物基因分 因中。有40％是通过T-DNA介导的基因诱捕技术分离 离、突变体库构建 以及在功能基因组学研究中的应用 的(MeinkeandScholl。2003)。 及 进 展 。 收稿 日期：2006．10．24；接受 日期：2007-05·15 基金项 目：国家 自然科学基金(No和教育部 “春晖计划 ”(No．Z2004·1·62002) ‘通讯作者。E·mail：wangcy@Izu．edu．cn