鹅掌楸碱银配合物体外诱导肺癌SPC-A-1细胞株凋亡及其机制研究.pdfVIP

鹅掌楸碱银配合物体外诱导肺癌SPC-A-1 细胞株凋 亡及其机制的研究 刘华钢，秦三海，王博龙，杨斌，刘丽敏 广西医科大学药理教研室，广西南宁（530021 ） E-mail ：hgliu@263.net 摘 要：目的：探讨鹅掌楸碱银配合物体外诱导肺癌 SPC-A-1 细胞株凋亡作用及其机制。 方法：应用MTT 法检测细胞的增殖活性，采用DNA ladder 检测、细胞形态学观察、酶联免 疫法进行凋亡检测；采用RT-PCR 检测细胞bcl-2 、bax mRNA 表达水平，免疫细胞化学法考 察细胞bcl-2 、bax 蛋白的改变，流式细胞术检测细胞内一氧化氮浓度。结果：鹅掌楸碱银配 合物对肺癌 SPC-A-1 株IC50 为3.447±0.436µg •mL-1 。在鹅掌楸碱银配合物的作用下，癌株 出现典型的凋亡特征，琼脂糖电泳出现典型的DNA 梯带，细胞形态学表现出细胞核裂解、 染色质聚集、核碎裂，胞浆浓缩、有空泡形成，对样本进行Caspase-3 活性检测后发现药物 作用后细胞中Caspase-3 含量明显高于对照组；用药组细胞较对照细胞bcl-2 mRNA 、蛋白表 达降低，同时bax mRNA 、蛋白表达升高；用药组细胞较对照细胞内NO 浓度升高。结论： 鹅掌楸碱银配合物有促进肺癌SPC-A-1 细胞株凋亡的作用，其机制可能是改变bax/ bcl-2 的 比值，改变凋亡的调定点，使得凋亡力量在细胞内占主导优势，同时诱导细胞内产生高浓度 NO 以增加对瘤细胞的杀伤作用。 关键词：鹅掌楸碱银配合物；肺癌；凋亡 中图分类号：R282171； R28411 ； R329121 ；R329125； R73412； R739186 鹅掌楸碱银配合物（AgLA2 ）是以中药两面针提取物鹅掌楸碱为母体，运用配位化学 的原理与Ag＋合成的金属配合物，分子式为 C H N O Ag ，分子量为 720，结构式如下： 34 18 3 9 + O O N O AgI O N O － O .NO3 本实验中，我们对鹅掌楸碱银配合物体外诱导肺癌 SPC-A-1 细胞株凋亡作用及其机制 进行了研究。 1. 材料与方法 1.1 材料 1.细胞株：人肺癌 SPC-A-1 株购自上海肿瘤研究所，5%CO2，37℃恒温条件下培养。 2.主要试剂：鹅掌楸碱银配合物为广西师范大学配位位合成；细胞凋亡-DNA ladder 抽 提试剂盒、 NO 荧光探针购自江苏碧云天生物技术研究所；human Caspase-3 Instant ELISA 购自 Bender 公司； MTT 购自 Amresco 公司； RPM I 1640 购自 GIBCO 公司；新生牛血清 购自杭州四季青公司；Trizol Reagent 购自 Invitrogen 公司；RevertAidTM First Strang cDNA Synthesis Kit 购自 MBI 公司；PCR Reagent 购自大连 TaRaKa 公司； 二步法免疫组化检测 试剂、鼠抭人bcl-2 、bax 蛋白单克隆抗体、浓缩型 DAB 试剂盒均购自北京中杉金桥生物技 术有限公司。 3. 主要仪器：二氧化碳培养箱为 Thermo Forma 公司产品，雷勃 MK3 酶标仪为 Thermo Labsystems 公司产品，Gel doc 2000 凝胶成像分析仪为美国 Bio-Rad 公司产品, 日本