血液中大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶耐药基因型研究.pdfVIP

第 31卷 6期 宁夏医科大学学报 2009年 12月 JournalofNingxiaMedicalUniversity ·713 · 文章编号 ：1674—6309(2009)06—0713—03 ． 荽 ． ,VIU 血液中大肠埃希菌超广谱 p一内酰胺酶耐药基因型研究 左艳君 一， 魏 军 ， 贾 伟 ， 李 刚 ， 赵志军 (1．宁夏医科大学 ，银川 750004； 2．宁夏医科大学 附属 医院医学实验中心 ，银川 750004) 摘要 ：目的 了解本地 区血液标本中产超广谱 B一内酰胺酶 (ESBLs)大肠埃希菌的分离率、耐药性和基因型。 方法 收集 临床血液标本分离的产 ESBLs的大肠埃希菌 26株 ，应用 PCR基 因扩增技术分别检测 SHV、TEM、 CTX—M、PER、CTX—M一2、Ampc、GES基 因，DNA测序确定 CTX—M、TEM基 因型。结果 在 26株菌株 中 15株 为 CTX—M型，占57．69％，11株为 TEM型，占42．31％。结论 本地区临床血液标本分离的产 ESBLs大肠埃 希菌流行 的主要基因型是 CTX—M 型和 TEM型 。 关键词 ：大肠埃希菌 ；超广谱 8一内酰胺酶 ；基因型 ；血液标本 中图分类号 ：R446．119 文献标识码 ：A 超广谱 B一内酰胺酶 (extended—spectrum—laetamases， 2．1 菌株鉴定 所有菌株 采用法 国生 物梅里埃公 司 ESBLs)主要 由肠杆菌科 的细菌产生 ，以大肠埃希菌和肺炎 VITEK一32全 自动微生物分析仪鉴定及药敏试验鉴定菌 克雷伯菌为代表…，是临床肠杆菌科细菌对第三代头孢菌 种 ，得到初步 ESBLs的结果 。 素耐药的重要机制 。ESBLs型细菌对多种抗生素耐药，易 2．2 ESBLs确证试验 采用美 国临床实验室标准化委员 引起 医院院内暴发流行 ，血液 中一旦 出现产 ESBLs的大肠 会(CLSI)推荐 的纸片扩散法进行 ESBLs表型确证l4J，质控 埃希菌 ，可引起 多器官甚至全身感染 ，给临床治疗带来极大 菌株为大肠埃希菌 ATCC25922。 困难 ，因此进行本地 区l临床血液标本 中分离 的 ESBLs型菌 2．3 药敏试验 按 K—B法将待测菌液接种 M—H平皿 的耐药性监测及耐药分子流行病学研究 ，对血液流行感染 上 ，贴上抗生素纸片 ，35℃培养 18—24h，测量抑菌圈直径 ， 性疾病的预防控制尤为重要。由于抗生素使用情况差异， 按 CISI标准判断敏感率 (s)、中介率 (I)、耐药率 (R)，共采 不 同国家 、地区 ESBLs种类不 同，国内报道 以SHV和 CTX— 用 15种抗生素。 M型较为常见[ ]，为 了解本地 区血流感染 ESBLs型大肠 2．4 细菌质粒 DNA的提取 采用传统的煮沸法提取质粒 埃希菌的耐药情况 ，对宁夏医科大学 附属医院2005年 1月 DNA 【 ， 调整菌液 的浓度使得 OD260／OD280在 O．4～0．6之间， 至 2008年 5月 l临床血液标本分离 的26株 ESBLs阳性菌株 作为模板液备用 。 耐药性和基 因型报告如下。 2．5 设计靶基 因PCR扩增反应体系 总反应体积 25tLL， 1 材料 其 中 10X buffer2．5ttL，dNTP4／IL，primer0．6X2ttL，TaqE 1．1 菌株来源 临床血液标本 中连续分离 出无重复 (同一 0．4tLL，模板 l ，用 ddH2O补足至25~／L。热循环参数为 ：预 患者 同一部位 只取第～次分离标本)26株 ESBLs阳性菌 变性 (94℃ 10min)一变性 (94℃ 30s)一 退火一延伸 (72℃ 株 。