转染p21WAF1基因对K562白血病细胞系增殖的抑制作用.pdfVIP

( ) 中国实验血液学杂志　Journal of Experimental Hem atology 2001 ; 9 2 1·15 · 转染 p21WAF1 基因对 K562 白血病细胞系增殖的抑制作用 1 杨 　慧 　　王申五 　　殷慧君 ( 1 ) 北京大学人民医院儿科 , 中心实验室 　　北京 　100044 摘要 　　为了探讨p21WAF1 基因对白血病细胞增殖的影响 ,构建了 p21WAF1 的逆转录病毒表达载体 , 通过 Fu GEN ETM 6 介导体外转染 p21WAF1 表达缺如的 K562 细胞。经筛选得到 G418 抗性 K562 细 胞系 ,用 RTPCR 和 Western 印迹检测到外源p21WAF1 的表达 ,用活细胞计数观察细胞增殖情况 , 同 时进行流式细胞术和软琼脂集落形成实验。结果表明 , K562p21WAF1 中可检测到 P21WAF1 蛋白及 mRNA表达 ,细胞增殖明显减慢 , G G 期细胞数增多 ,细胞在软琼脂中的集落形成能力下降。以上 0 1 结果表明 ,p21WAF1 基因可抑制 p21WAF1 表达阴性的白血病细胞增殖 ,可能成为白血病基因治疗的靶 基因。 关键词 　　p21WAF1 　　K562 白血病细胞系 　　细胞增殖抑制 中国图书资料分类法分类号 　　R733. 7 　　细胞增殖失控是肿瘤发生的本质之一 , 由细胞 公司 ,核酸分子量标准购自华美公司。 ( ) ( p21WAF1 逆转录病毒表达载体的构建 周期蛋白 cyclin ,依赖细胞周期蛋白的激酶 cyclin WAF1 ) 含 2. 1 kb 人 p21 全长 cDNA 的质粒 pBS dependent kinase ,CD K 和依赖细胞周期蛋白的激酶 WAF1 ( ) p21 由美国 Howard Hughes Medical Institute 的 的抑制剂 cyclindependent kinase inhibitor , CD KI 组成的细胞周期调节网络 ,与肿瘤发生的关系越来 Stephen J . Elledge 教授惠赠 ,两端酶切位点为 Xho 越引起人们关注。P21WAF1 蛋白是细胞从 G 期向 S Ⅰ。分别用Xho Ⅰ切pBSp21WAF1 及 pL XSN ( 5. 8 1 WAF1 期转换的主要抑制因子。研究表明 ,p21WAF1 是 p53 kb) ,液氮冻融法回收p21 片段和pL XSN 线性片