人血管内皮抑制素vasostatin120-180(VAS)在大肠杆菌中表达纯化及初步抗血管生成活性与研究.pdfVIP

人血管内皮抑制素vasostatin120-180 （VAS）在大肠杆菌 中的表达纯化及初步的抗血管生成活性研究 徐倩、孙启明、华子春 （南京大学医药生物技术国家重点实验室，江苏 南京 210093） 【摘要】目的：在大肠杆菌中克隆和表达人源血管内皮抑制素 vasostatin120-180（VAS） 基因，并进行分离纯化及抑制新生血管生成活性鉴定。方法：根据大肠杆菌偏爱密码子、应 用化学合成和分子克隆方法得到人源血管内皮抑素 120-180 片段（即 VAS） 的编码基因。 通过 PCR 和限制性内切酶消解，将 VAS 编码基因克隆入大肠杆菌表达载体 pET28a 中，并在 BL21（DE3）菌株中经 IPTG诱导、表达带有 His融合标签的 His-VAS重组蛋白。VAS蛋白的 表达水平大约占细菌总蛋白的 45%，大多数目的蛋白以包涵体形式存在。经过体外包涵体变、 复性及纯化，采用 SDS分析鉴定，用 CAM 试验进行重组蛋白活性的生物活性鉴定。结 果：经 DNA序列分析鉴定，重组质粒 pET28a-VAS构建成功，IPTG诱