几种超高分辨率荧光成像方法原理及进展.pdfVIP

New Te chniqu e s 新技术讲座 生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biophysics 2009, 36(12): 1626~1634 几种超分辨率荧光显微技术的原理和近期进展* 1) 2) 1) 2)** 吕志坚 陆敬泽 吴雅琼 陈良怡 1) 2) ( 北京市科学技术情报研究所，北京100044； 中国科学院生物物理研究所，北京100101) 摘要 在生命科学领域，人们常常需要在细胞内精确定位特定的蛋白质以研究其位置与功能的关系．多年来，宽场/ 共聚焦 荧光显微镜的分辨率受限于光的阿贝/ 瑞利极限，不能分辨出200 nm 以下的结构．近年来，随着新的荧光探针和成像理论 的出现，研究者开发了多种实现超出普通共聚焦显微镜分辨率的三维超分辨率成像方法．主要介绍这些方法的原理、近期进 展和发展趋势．介绍了光源的点扩散函数(point spread function, PSF) 的概念和传统分辨率的定义，阐述了提高 平面分辨率 xy 的方法．通过介绍单分子荧光成像技术，引入了单分子成像定位精度的概念，介绍了基于单分子成像的超分辨率显微成像方 法，包括光激活定位显微技术(photoactivated localization microscopy, PALM) 和随机光学重构显微技术(stochastic optical reconstruction microscopy, STORM) ．介绍了两大类通过改造光源的点扩散函数来提高成像分辨率的方法，分别是受激发射损 耗显微技术(stimulated emission depletion, STED)和饱和结构照明显微技术(saturated structure illumination microscopy, SSIM) ． 比较了不同的 轴提取信息的方法，并阐述了这些方法与 平面上的超分辨率显微成像技术相结合所得到的各种三维超分 z xy 辨率显微成像技术的优劣．探讨了目前超分辨率显微成像的发展极限和方向． 关键词 超分辨率荧光显微技术，点扩散函数，PALM ，STORM，STED，SSIM 学科分类号 Q27 ，Q63 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2009.00242 现代生物医学研究中为了更好地理解人体生命 胞器微小结构的演化，而并不影响生物体系的生物 的作用过程和疾病的产生机理，需要观察细胞内细 活性． 胞器、病毒、寄生虫等在三维细胞空间的精确定位 近年来，随着新型荧光分子探针的出现和成像 和分布．另一方面，后基因组时代蛋白质科学的研 方法的改进，光学成像的分辨率得到极大的改进， 究也要求阐明：蛋白质结构、定位与功能的关系以 达到可以与电子显微镜相媲美的精度，并可以在活 [2～5] 及蛋白质- 蛋白质之间发生相互作用的时空顺序； 细胞上看到纳米尺度的蛋白质 ．这些技术上的 生物大分子，主要是结构蛋白与RNA 及其复合 进步势必极大地推动生命科学的发展，为了增强生 物，如何组成细胞的基本结构体系；重要的活性因 物学家对于超分辨率荧光显微成像(super-resolution 子如何调节细胞的主要生命活动，如细胞增殖、细 fluorescent microscopy)机理的理解，以下我们将介 胞分化、细胞凋亡与细胞信号传递等．反映这些体 绍传统的荧光显微成像的极限，突破此极限超分辨 系性质的特征尺度都在纳米量级，远远超出了常规