尿微量白蛋白检测抗体微阵列构建.pdfVIP

·555· ·新技术与方法· 基于直接标记法尿微量白蛋白 检测抗体微阵列的构建 王丽梅 刘必成 吕林莉 朱颖 蔡珂丹 郑敏 【摘要】 目的探讨基于直接标记法的尿微量自蛋白检测抗体微阵列(也称抗体芯片) 构建方法，并评价其技术可行性。方法通过玻片处理、活化、固定等程序构建白蛋白抗体 芯片。摸索用生物素标记标准品白蛋白及尿液样本的最佳条件。经封闭后加入生物素标记的 标准品向蛋白，孵育，洗涤后加入链酶亲和素．Cy3，再经过孵育、洗涤后，用共聚焦激光扫描仪 获取荧光强度值。根据不同浓度标准品白蛋白的荧光信号强度值做出浓度．信号强度曲线，并 评价其检测灵敏度、特异性、重复性。收集临床糖尿病患者尿液标本，对尿液样本同时行免疫 比浊法和抗体芯片法检测白蛋白值。结果生物素标记标准品白蛋白和样本的最佳总蛋白／ 生物素质量比为2：1。根据标准品白蛋白所做出的标准曲线其R：0．99；捕获抗体浓度为1 g／L时，最低白蛋白检测浓度为0．0617mg／L。阵列内变异系数为3．35％～7．59％；阵列间变异 系数为6．78％一9．22％。抗体芯片检测值与免疫比浊法检测值呈正相关(Rz=0．9199，P 0．01)。结论成功构建基于直接标记法的抗体芯片，其具有