近年蛋白质组学研究进展.pptVIP

这种方法代表技术是蛋白质芯片技术 * 此种方法的代表技术是噬菌体展示技术和酵母双杂交技术 * 在这里可以看到功能基因组学是以高通量的蛋白质组研究技术为出发点的即刚才介绍的策略二是以策略一的发展而发展的 * LC液相色谱 MS质谱 * 对于蛋白质鉴定而言, 高通量、 高灵敏度和高精度是 3 个关键指标。现在许多新的杂交质谱的出现己经基本上可以同时达到以上 3 个指标, 从而实现对蛋白质准确和大规模的鉴定。 * 蛋白质组学的研究进展 蛋白质组学定义 在 20 世纪 90 年代中期, 国际上产生了一门新兴学科—— —蛋白质组学( Proteomics) , 它以细胞内全部蛋白质的存在及其活动方式为研究对象。 蛋白质组学旨在阐明生物体全部蛋白质的表达模式及功能模式, 其内容包括鉴定蛋白质的表达、 存在方式(修饰形式)、 结构、 功能和相互作用等。 蛋白质组学研究的策略 一种策略是采用高通量的蛋白质组研究技术分析生物体内尽可能多乃至接近所有的蛋白质, 这种观点从大规模、 系统性的角度来看待蛋白质组学, 也更符合蛋白质组学的本质。 另一种策略称功能蛋白质组学即研究不同时期细胞蛋白质组成的变化, 如蛋白质在不同环境下的差异表达, 以发现有差异的蛋白质种类为主要目标。这种观点更倾向于把蛋白质组学作为研究生命现象的手段和方法。 蛋白质组研究范围 ( 1)对细胞或组织内蛋白质的表达模式及修饰(表达蛋白质组学)的研究。 ( 2)建立在 X- 射线单晶衍射分析(晶体结构分析)、 多维核磁共振波谱分析、 电镜二维晶体三维重构术(电子晶体学)技术基础之上的蛋白质序列和高级结构(结构蛋白质组学)的研究。 ( 3) 对蛋白质的胞内分布及移位( 细胞图谱蛋白质组学)的研究: 确定蛋白质在亚细胞结构中的位置, 通过纯化细胞器或用质谱仪鉴定蛋白复合物组成等。 ( 4)蛋白质的功能模式(功能蛋白质组学) : 目前主要集中在蛋白质与蛋白质及其与其他分子的相互作用网络关系的研究。 对蛋白质组组成的分析鉴定是蛋白质组学中的与基因组学相对应的主要内容。 它要求对蛋白质组进行表征, 即所有蛋白质的分离与鉴定及其图谱化。 蛋白质组学的技术 蛋白质研究技术远比基因技术复杂和困难。 不仅氨基酸残基种类远多于核苷酸残基, 而且蛋白质有着复杂的翻译后修饰, 如磷酸化和糖基化等, 这些给分离和分析蛋白质带来很多困难。 此外, 通过表达载体进行蛋白质的体外扩增和纯化也并非易事, 从而难以制备大量的蛋白质。 蛋白质组研究中的样品制备 原则: ①尽可能地提高样品的溶解度, 并保持在整个电泳过程中蛋白质的溶解状态。 ②防止溶液介质中对蛋白质的人为修饰, 首先在样品溶解之前要使所有能使蛋白质发生修饰的酶迅速失活; 其次不能把多肤置于化学修饰易发生的环境中。 ③破坏蛋白质与其他生物大分子之间的相互作用以产生独立的多肽链, 并使蛋白质处于完全变性状态。 ④去除非蛋白杂质。 为了提高样品制备的效率和质量, 现在许多新的试剂和方法被广泛地使用。 蛋白质组研究中的样品分离和分析 二维凝胶电泳技术: 利用蛋白质的等电点和分子量,通过双向凝胶电泳的方法将各种蛋白质区分开来是一种很有效的手段。通常一维是等电聚焦，另一维是SDS凝胶电泳。 二维色谱技术： 蛋白质混合物直接通过液相色谱分离, 然后进入 质谱系统获得肽段分子量; 再通过串联 质谱技术得到部分序列信息, 最终通过计算机联网查询, 就可以对蛋白进行鉴定。 质谱技术： 当前蛋白质组研究的核心技术就是双向凝胶电泳—— 质谱技术, 即通过双向凝胶电泳将蛋白质分离, 然后利用质谱对蛋白质逐一进行鉴定。 定量蛋白质组学 目前进行定量蛋白质组学研究的主要技术有: 蛋白质荧光显色技术;荧光差异显色技术;稳定同位素标记技术;同位素亲和标签技术;蛋白质芯片技术。 抗体芯片技术 蛋白质芯片( Protein chip)是高通量、 微型化和自动化的蛋白质分析技术。 它是指在硅物质如玻璃等固相支持物表面高密度排列的探针蛋白点阵, 通过如抗原—— —抗体专一性结合等各种相互作用特异地捕获样品中的靶蛋白, 然后通过检测器对靶蛋白进行定性或定量分析。 蛋白质芯片上的探针蛋白可根据研究的目的不同, 选用抗体、 抗原、 受体、酶等具有生物活性、 高度特异性和亲和性的蛋白质。 与DNA 芯片一样, 蛋白质芯片同样蕴涵着丰富的信息量, 必须利用专门的计算机软件包进行图象分析、 结果定量和解释。 它能够同时分析上千种蛋白质的变化情况, 可用于疾病诊断、 蛋白质相互作用等研究, 是蛋白质组学研究比较有发展潜力的技术工具。 酵母双杂交系统 酵母双杂交系统是在真核模式生物酵母中进行的, 研究活细胞内蛋白质相互作用, 对蛋白质之间微弱的、 瞬间的作用也能够通过报告基因的表达产物敏感地检