2005年版中国药典无菌检查法.pptVIP

2006－07 2005年版《中国药典》无菌检查法 罗慧萍 四川省食品药品检验所 2006年7月 ◆ 2005年版无菌检查法介绍 ◆ 2005年版药典无菌检查方法的验证 无菌检查基本定义 无菌检查是检查要求无菌的药品.医疗器具.原料.辅料.以及要求无菌的其他物品是否染有活菌的一种方法。 符合无菌检查法的规定仅表明了供试品在该检验条件下未发现细菌和真菌污染。 无菌检查环境要求 无菌检查在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行,其全过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染。 一般 18 ℃ ~26℃ ，相对湿度 45％~65％ 例行消毒处理（试验前、后） 定期洁净度检查（一般3～6月一次） 洁净度检查 单向流空气区、工作台面及环境应定期按 《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降 菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。 隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的 洁净度须符合无菌检查的要求。 无菌检查培养基 一般采用商品脱水培养基，临用时按照使用说明书进行配制 。 培养基的pH值应符合规定，分装好的培养基及时密封后必须在配制当天（2小时内最佳）进行灭菌处理。 配制时所用器具应采用洁净玻璃制品，避免增加培养基中的金属离子及其他微量元素而影响微生物的生长，鉴别。 制备好的培养基应在 2-25℃保存，保存在非密闭容器中，应在3周内使用；保存在密闭容器中，可在1年内使用。 无菌检查培养基 1.常用培养基及用途 硫乙醇酸盐流体培养基：培养好氧菌、厌氧菌。 改良马丁琼脂培养基：培养真菌 2.选择性培养基及用途:按硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基的处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适量的中和剂或表面活性剂。中和剂或表面活性剂的加入量应通过验证试验验证。如 对氨基苯甲酸：用于磺胺类供试品 聚山梨酯80：用于非水溶性供试品 β-内酰胺酶：用于β-内酰胺类供试品 0.5%葡萄糖肉汤培养基：用于硫酸链霉素等抗生素的无菌检查 硫乙醇酸盐流体培养基氧化层颜色的要求 接种前：培养基氧化层的高度不得超过培养基深度的1/5，否则，须经100℃水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并应防止被污染。 培养后：装量与容器高度的比例应符合培养结束后培养基氧化层（粉红色）不超过培养基深度的1/2。 培养基的装量 直接接种法规定接种的供试品体积不得大于培养基体积的10%,同时,硫乙醇酸盐流体培养基每管装量不少于15ml,改良马丁培养基每管装量不少于10ml;医用器械体积过大时，培养基用量可在2000ml以上。 薄膜过滤法为100ml/管或50 ml/管． 无菌检查培养基 培养基的适用性检查 培养基的无菌性检查 培养基的灵敏度检查 符合规定的培养基方可供试品的无菌检查试验。 培养基的无菌性检查 每批培养基随机取不少于5支（瓶），培养14天，应无菌生长。 本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行，但是，一旦所用培养基不符合无菌要求，供试品的无菌检查结果应视为无效。 培养基的灵敏度检查 硫乙醇酸盐12ml，9支，4株菌，各1ml，每种培养基各接种2支（原3支），另1支培养基空白对照。培养3d(原5天)。 改良马丁9ml，5支，2株菌，各1ml，每种培养基各接种2支（原3支），另1支培养基空白对照。培养5d。 结果判定 空白管培养基无菌生长，加菌的培养基管均生长良好，判灵敏度检查合格。 （原3支管有2管生长，合格。） 灵敏度检查用菌种 金黄色葡萄球菌【CMCC(B)26003】 铜绿假单胞菌【CMCC(B)10104】 枯草芽孢杆菌【CMCC(B)63501】 生孢梭菌【CMCC(B)64941】 白色念珠菌【CMCC(F)98001】 黑曲霉【CMCC(F)98003】 菌液的制备 取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌30-35℃培养18-24小时的新鲜培养物，白色念珠菌在23-28℃24-48小时的新鲜培养物，黑曲霉23-28℃培养5-7天的培养物，分别用0.9％无菌氯化钠溶液稀释制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。。 检验量 无菌检查方法 直接接种法 薄膜过滤法：只要供试品性状允许，应采用薄膜过滤法。 优先采用封闭式薄膜过滤器。 直接接种法9种供试品的处理和接种 ①一般水溶性供试品 取规定量，直接接种至培养基中。 ②混悬液等非澄清水溶液供试品 取规定量接种至培养基中。 ③固体制剂供试品 取规定