人眼小梁细胞体外培养及TNF-α对其表达MMPs的影响.pdf

人眼小梁细胞的体外培养及TNF。皿对其表达MMPs的影响 trabecular 目的： 探讨体外培养人眼小梁细胞(human cells，HTCs)的方法， factor— necrosis 观察其生物学特性。并在此基础上研究肿瘤坏死因子一a(tumor B(Nuclear B)的特异抑制剂一一二硫氨基 意义及核因子一K B，NF．K factor．Kappa dithocarba—mate，PDTC)对其表达的影响。 甲酸毗啶(Pyrollidine 方法： (I)采用组织块培养法进行体外HTCs的培养，运用二甲基噻哗二苯 tetrazolium bromide]，MTI、) 基四唑溴赫(【3一(4，5-dimethylthiazol2一y1)一2，5一diphenyl 比色法、倒置显微镜、透射电镜、兔疫细胞化学法等方法观察体外培养的HTCs的 细胞表达MMP一3、MMP一9的量：运用NF．KB的特异抑制剂二硫氨基甲酸吡啶 dithocarba—mate，PDTC)抑制NF-KB的活化，观察不同浓度TNF一Ⅱ (Pyrollidine 对体外培养的HTCsMMP．3，一9表达的影响。 结果：(1)组织块培养lO，15天后可见细胞从其边缘向外生长，倒置显微镜下成梭 形、圆形、椭圆形、并有多个突起，电镜可见HTCs表面有较多的微绒毛，细胞间 缝隙连接，胞质内见很多次级溶酶体。(2)免疫细胞化学法检测纤维粘连蛋白 specific 别为O．88±O．02，1．02±O 01，1．20±0．02，各实验组与对照组O．65±O．01相比， 78±O．07，O．87±O 入PDTC(100¨M)，MMP一3／B—actin吸光度比值分别为O03，分 NA 25ng／ml的n吁．Ⅱ实验组细胞提前30rain 量分别为99．18±8．19，12575±566，分别较未加入PDTC组有显著性差异(P0．05)； 别较未加入PDTC组有显著性差异(PO．05)。 结论：(1)掌握细胞培养基本技术和人眼小梁细胞(ttTCs)生长特点、超微 结构及免疫细胞化学染色等特点，能够成功地进行体外HTCs的培养，并且可以确 MMP一9。(3)TNF—a可调节HTCs K B启动MMP一3，MMP．9的转录，但除了有NF。K B参与MMP一3、MMP。9转录的 启动外，还有其他转录因子的参与。 MMPsNF，KB 关键词：细胞培养小梁细胞青光眼TNF—a EffectofTNF—aonMMPs in CulturedHTCs Expression Abstract Purpose： trabecularmeshwork vitroand To thecultureofhuman