重组类人胶原蛋白表达体系过程优化.pdfVIP

重组类人胶原蛋白表达体系过程优化.pdf

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摘要 本文对重组大肠杆菌分批.补料培养生产类人胶原蛋白的发酵条件即诱导时 机和诱导强度、富氧方式(葡萄糖反馈调控、适当提高罐压、通入富氧空气)、 诱导前后比生长速率、补氮方式(连续补氮、阶段式补氮)、动力学模型进行了 系统的研究,结果表明: ac保温2~3h,然后降温至 1.最佳诱导条件为对数生长中后期进行诱导,42 39oC继续培养5-6h,发酵结束时细胞浓度和类人胶原蛋白的浓度可分别达 68.94 VL(DEW)和13.16g/L。 2.诱导前的比生长速率影响细胞生长和类人胶原蛋白的表达,为获得尽可 能多的细胞和目标蛋白,诱导前的最适比生长速率为O.15加.20h~:诱导后的比 生长速率对表达期的细胞生长和类人胶原蛋白的表达产生显著影响,在此期间比 生长速率过高或过低均不利于目标蛋白的合成,且最适比生长速率为0.04加.05 h~,发酵结束时细胞和类人胶原蛋白的浓度可分别达69.5g/L(DCW)和13.8 g/L口 3.最佳的发酵条件为:采用阶段式补氮方式;当溶氧低于20%(空气饱和 (DCW),类人胶原蛋白浓度为16.75 g/L。 对动力学模型的参数进行优化求解,结果表明动力学模型与实验值吻合良好。 在分批发酵阶段,动力学模型为 0.727s “。—0.674—+s’ 坐。一 旦:!兰!些 一0.054x: dt 0.352(o.674+s1 在补料阶段(诱导前)的动力学模型为 0.727s “3—0.674—+s’ 。 0 . 674+o.05” 0.674+J5,一5‘. +s) 生=而0.72石7sx一去【而0而.727s丽xdt 179(0 +0.054x】; 在诱导阶段动力学模型为 0.727s ‘0.674+s 玎.一1.238肛+0.511一堂, Ⅳ dx 0.727sx工 ,0.727sx 。 0.064、 “ i二l—0.097(0.—674+s) —dt一0.674+s td-115.0+p832dP--1.撇而0.72焉7sx+0.511x-.1-(1丽+“05. 6740.0+s+x丽s727.而0面‘ ‘0. . 4-0064s) . 、 警m“… 097(0674 生;上【黑+o.054x+上(“238肛+o.511一塑h卜dt 0.064、 1 s,一5‘0.097(o.674-I-s1 Ⅳ7

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