鸡传染性支气管炎病毒（IBV）结构蛋白基因的克隆、表达及应用研究.pdfVIP

摘要 鸡传染性支气管炎(IB)是由传染性支气管炎病毒(IBV)引起的一种急性、高度接触性传 染病，已成为养鸡业中危害最大的病毒性传染病之一。IBV不具有血凝性，因此无法利用血 凝抑制试验来检测感染或免疫后动物体内IBV抗体。鸡体内IBV抗体的检’狈l具有以下作用：1、 对鸡体内IBV母源抗体的检测可以为确定适当的免疫时间提供依据：2、对免疫后鸡群血清IBV 抗体水平检测可以评估免疫效果；3、对鸡血清IBV抗体水平的检测也可以作为IB诊断的辅助 手段。有报道利用气管环中和试验检’狈I]IBV抗体，但该试验费时、费力，难以广泛推广。酶 ～ 联免疫吸附实验(ELISA)以其敏感、客观、成本低廉等优点，在传染病的诊断、抗体检测等 鬈 方面得到了广泛地运用。目前，国外已有商品化的IBV抗体检测试剂盒，但该试剂盒是以灭 活IBV为包被抗原，需要大量地培养IBV病毒，存在散毒的潜在危险，而且有关的IBV纯化试 验表明，IBV在离心纯化过程中，病毒粒子容易破碎，冠极易丢失，不易得到完整的IBV病毒 抗原。为解决以上问题，本实验设计通过基因工程方法表达病毒结构蛋白基因，利用重组结 构蛋白代替全病毒作为ELISA检测包被抗原，建立检测IBv血清I曲抗体和眼泪IgA抗体的方 法，为检测IBv抗体提供依据。 1．克隆了IBVM41毒株N基因和IBVH52毒株S1基因，对它们进行了序列测定和与GenBank中 收录的IBVN基因、S1基因序列进行了比较分析，并用ClustalX矛IMega软件将N基因、 S1基因与公布的标准序列做同源性比较和系统进化分析。 2．在原核系统中表达了IBVN结构蛋白基因和S1结构蛋白基因的一个抗原表位片断基因， 并利用纯化得到的重组蛋白建立间接ELISA方法，对雏鸡血清和眼泪中的母抗和对人工 感染IBVM41雏鸡血清和眼泪中的抗体进行了检测，通过相关性分析，表明重组N蛋白是 理想的检测用抗原，具有较好的特异性和敏感性，S1多肽的一个片断也可做检测用抗原， 但特异性较差。 3．许多病原体通过胃肠道、呼吸道、泌尿生殖道粘膜侵入动物机体，因此，有效的粘膜免 疫在抵抗这类病原时具有重要的地位。本实验通过对眼泪中粘膜抗体的检测，建立了检 狈J]IBV感染后粘膜抗体水平的方法。 关键词：鸡传染性支气管炎病毒：N蛋白；s1蛋白；酶联免疫吸附实验；粘膜免疫 II AvianInfectious a acuteand diseaseof Bronchitis(IB)ishigllly contagious chikenscausedAvianInfectiousBronchitis hasbeenoneofthe by virus(mV)，and diseases virus which hazardthefowl is lackof highest industry．IBV hence and the haemagglutination speciality h