黄芩苷对颈部交感神经节细胞P2X_(2-3)受体介导心肌缺血引发交感兴奋反射作用与研究.docVIP

P2X3受体论文：黄芩苷对颈部交感神经节细胞P2X_（2/3）受体介导心肌缺血引发交感兴奋反射的作用研究 【中文摘要】和冠心病、心肌梗死是临床常见的疾病,心肌缺血时心肌细胞等释放大量ATP至细胞外或细胞间隙刺激心脏感觉传入神经,加强交感兴奋反射活动,导致颈部交感神经节节后交感传出神经兴奋性增强,从而引起心率加快、血压升高,加重心肌损伤。ATP激活P2X受体产生效应。我们实验室前期研究结果显示,颈部交感神经节的P2X3和P2X2/3受体在心肌缺血伤害性感觉传递中起重要作用。黄芩苷,是从唇形科植物黄芩的干燥根中提取的一种黄酮类化合物,具有抗炎、抗氧化、抗病毒和抗癌的性质。近些年,广泛的研究证实了黄芩苷对许多疾病具有治疗效果,是一种重要的临床药物。但是,黄芩苷对心肌损伤的保护机理尚未明确,是否可作用于颈部交感神经节神经细胞P2X2/3受体影响心肌缺血引发的交感增强反射对心肌产生保护作用目前尚未见文献报道。本实验拟应用心肌缺血大鼠模型,观察黄芩苷处理后大鼠血压、心率的变化,以及对颈上、星状交感神经节细胞P2X2/3受体表达的影响,了解黄芩苷在心肌缺血引发的交感反射中的作用及其可能机制。方法：（1）结扎大鼠左冠状动脉前降支建立心肌缺血动物模型,通过心电图、心肌HE染色观察黄芩苷对心肌缺血损伤大鼠心功能及形态的影响；（2）使用无创法血压计测量大鼠的血压、心率,观察黄芩苷处理的心肌缺血大鼠血压、心率的变化,并与对照组比较；（3）检测血清肌酸激酶（CK-MB）和心肌肌钙蛋白T（cTn-T）两种心肌酶含量,观察黄芩苷对心肌缺血损伤的作用；（4）免疫荧光双标法观察心肌缺血模型组、心肌缺血模型黄芩苷处理组及对照组颈上、星状交感神经节细胞及心肌的P2X3、P2X2受体的共表达情况。（5）Western Blot和免疫组织化学法观察心肌缺血模型组、心肌缺血模型黄芩苷处理组及对照组的P2X3、P2X2受体的表达情况。（6）RT-PCR观察心肌缺血模型组、心肌缺血模型黄芩苷处理组及对照组颈上、星状交感神经节细胞及心肌的P2X3、P2X2受体mRNA表达的变化。（7）ELISA的方法检测各组大鼠血清中肾上腺素浓度的变化；（8）CellTiter-Glo（?）发光法检测各组大鼠ATP浓度的变化。结果：（1）结扎大鼠左冠状动脉前降支,心电图立即出现ST段呈弓背向上抬高,模型组14天后心电图出现深大的病理性Q波,HE染色显示明显出血,心肌萎缩、纤维化甚至出现坏死灶,外观上可见代偿性肥大和大面积的结缔组织增生现象。然而,黄芩苷处理后大鼠心电图的异常变化和心肌损伤明显改善。（2）心肌缺血大鼠收缩压、舒张压、心率与正常对照组相比均增加（n=5）（p0.05）。黄芩苷处理组大鼠收缩压、心率略高于正常组、假手术组和黄芩苷对照组（n=5）（p0.05）。（4）免疫荧光双标染色结果显示,大鼠颈上、星状交感神经节细胞和心肌组织存在P2X3受体和P2X2受体的共表达,心肌缺血模型组表达明显高于对照组,黄芩苷处理心肌缺血后,P2X3受体和P2X2受体表达明显下降。（5）免疫组织化学染色结果显示,心肌缺血组大鼠颈上、星状交感神经节细胞和心肌组织P2X3受体和P2X2受体表达高于正常组、假手术组、黄芩苷对照组和黄芩苷处理组（p0.05）。（6）RT-PCR结果显示,心肌缺血模型组大鼠颈上、星状交感神经节细胞和心肌组织P2X3受体和P2X2受体mRNA的表达高于正常组、假手术组、黄芩苷对照组和黄芩苷处理组,黄芩苷处理心肌缺血后,灰度值明显降低（p0.05）。（9）CellTiter-Glo（?）发光法检测各组大鼠血清中ATP浓度结果显示,心肌缺血组血清中ATP含量高于正常组、假手术组、黄芩苷对照组和黄芩苷处理组（p0.05）。结论：黄芩苷可以降低心肌缺血大鼠颈部神经节神经细胞及心肌交感神经P2X3和P2X2受体表达,从而减轻心肌缺血引发的血压升高、心率加快。颈上星状神经节细胞P2X2/3受体介导心肌缺血引发的交感兴奋反射,黄芩苷减轻心肌缺血组大鼠颈上、星状交感神经节细胞和心肌组织P2X3受体和P2X2受体mRNA和蛋白表达,表明黄芩苷可能通过作用于P2X2/3受体影响心肌缺血损伤引发的交感兴奋反射对心脏产生保护作用。 【英文摘要】Backround and :Coronary heart disease and myocardial infarction is clinically common diseases. During myocardial ischemia, a number of cell types release large quantities of ATP in the extracellular or interstitial space, which activa