MDR1shRNA表达质粒构建及逆转肾癌细胞ACHN多药耐药试验与研究.pdfVIP

MDRlshRNA的表达质粒构建及逆转肾癌细胞ACHN 多药耐药的试验研究 中文摘要 关键词：RNA干扰多药耐药短发央RNA重组质粒肾癌 卡RNA(short hairpinRNA，shRNA)真核表达载体，针对MDRl基因过度表达机 制，研究干扰片段逆转肾癌细胞ACHN多药耐药的可行性。 方法： 1)分别针对MDRl基因的两个不同位点，按BarnH 反义序列，退火连接及磷酸化形成双链后将其依次连入pRZ载体，构建成能产生 MDRl短发卡RNA的质粒。2)体外培养肾癌细胞ACHN，采用脂质体介导的基因转染 敏感性，免疫组织化学检测细胞膜表面P—gP表达，半定量RT-PCR检测MDRl基因的 表达．4)采用spssl6．0统计软件进行分析处理，数据均采用X±S表示，组间比 较均采用两样本配对t检验，PO．05表示差异有显著性。 达，其中转染48h的绿色荧光蛋白表达最强，转染效率分别为75．35±1．15％、 ACHN IC50分别下降为 空白对照组的IC50约为2．5ug／ml，转染pRZ—A、pRZ—B 学显示细胞表达P—gP水平明显降低，转染pRZ—A96h细胞P—gP的阳性表达率与空 白对照组有差异显著性(t=15．621 MDRl mRNA基因表达显著降低，与未转染ACHN卡H比，分别下降了82．5％和77．5％； 统计学分析2条序列抑$IJMDRl基因表达差别无显著性(pO．05)。 结论：成功构建了能表达MDRl 逆转肾癌耐药细胞ACHN的多药耐药，提高ACHNg于ADM的敏感性，抑制P—gP介导的 多药耐药。 6 MDRl-mediatedshRNAconstructionof and onit expressionplasmidstudy ofrenalcarcinomacell the Resistance ACHN ReversingMultidrug Abstract resistance；shortRNA；recomb·— hairpin Keywords-RNAinterference；Multi—-drug carcinoma ination；plasmids；renal of constructtwo mdrl—mediated Objective：To expressingplasmids shRNA(short RNA，shRNA theMDRl hairpin by whethertwodifferentinterference mechanisms，research geneover-expression Canreversethe resistanceinhumanrenalcarcinomaACHN。 fragments multi—drug METHODS- toBamH 1)According EcorI