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一文一 一
DNA甲基化对人TIG2基因在肺癌细胞中表达的影响
日U 昌
目前关于肺癌发生机制的研究主要集中于分子和细胞生物学水平,包
括抑癌基因在内的相关基因的失活在非小细胞肺癌(NSCLC)的发生、发展
过程中发挥重要作用。基因的失活方式有很多,而启动子CpG岛的异常甲
基化受到越来越多的重视。最近的研究证实,启动子CpG岛甲基化可能在
NSCLC发生、发展过程中发挥重要作用,并且是导致抑癌基因失活的重要
机制。
Tazarotene(他扎罗汀)是维甲酸的类似物,作为一种药物可用来治疗一
gene一1),TIG2和
TIG3的表达。在正常人皮肤中,TIG2基因是高水平表达的,而在牛皮癣患
者皮肤中表达沉默或低水平表达。目前对T1G2研究认为,TIG2是孤儿G
G
蛋白偶联受体(orphanprotein—coupled
dendritic
配体,在体外具有特异趋化未成熟树突状细胞(immaturecell,iDC)
症相关的蛋白酶,可切割TIG2前体的一COOH端,使耵G2活化,在
ChemR23介导下发挥趋化活性。TIC2广泛表达在人体正常组织中,但在肿
瘤中,TIG2基因的表达和功能研究目前国内外未见报道。
subtractive
在以前的研究中,我们应用抑制消减杂交技术(suppressive
其中,发现TIG2基因在正常肺细胞中表达,而在肺癌细胞中表达沉默,提示
TIG2基因可能在肺癌的发生、发展中起作用,但其表达沉默的分子机制还
未见报道。
本研究是在前期研究的基础上,检测TIG2基因在肺癌细胞和正常肺细
胞中的表达,然后在肺癌细胞中加入去甲基化试剂,检测TIG2基因表达的
变化。应用CpG岛预测软件分析TIG2基因启动子和第一外显子区域CpG
岛分布,甲基化特异PCR方法检测7F1G2基因是否发生甲基化,以及临床肺
癌和癌旁正常肺组织r11G2基因甲基化情况。初步阐释TIG2基因在肺癌细
胞中表达沉默的分子机制,为研究TIG2基因在肺癌中的生物学功能奠定基
础.为临床早期诊断NSCLC提供理论依据。
材料和方法
一、材料与试剂
1.细胞培养
从液氮中取出细胞株,迅速放入温水(37。C)中,彻底融化,加入预热的
含有血清的培养基,离心,去上清,加入培养基重悬,转移到培养瓶中,放入
5.0%CO:培养箱中培养,观察。
2.临床标本收集和保存
取临床(附属第一医院胸外科)患者肺癌及其癌旁的正常肺组织标本,
经病理和影像诊断为肺癌。将手术切割的标本立即放人液氮中,送到实验
室,保存在一70℃冰箱中。
二、TIG2基因在肺癌细胞和正常肺细胞中的表达
RN
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