H5亚型禽流感病毒反应原性差异及ELISA检测方法的研究.pdfVIP

维普资讯 中国兽医科学 2007，37(10)：839—844 VeterinaryScienceinChina 中图分类号 ：S852．659．5 文献标识码 ：A 文章编号 ：1673—4696(2007)10—0839—06 H5亚型禽流感病毒反应原性差异及 ELISA 检测方法的研究 宋建领 ，张文东 ，张富强。，李作生。，冯子 良。，吕 粤 ，岳 亮 ，王金萍 ， 胡媛媛 ，张应 国 ，范泉水。，邱 薇 。 (1．云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室 ，云南 昆明 650224；2．云南省动物疫病预防控制中心， 云南 昆明 650051；3．成都军区疾病预防控制 中心，云南 昆明 650032) 摘要：在获得禽流感病毒多克隆抗体及 H5亚型特异性单克隆抗体的基础上，建立了H5亚型特异性抗 原捕捉 ELISA检测方法。通过分析不同单克隆抗体与不同禽流感毒株的反应性差异，筛选高特异性和高敏 感性的H5亚型单克隆抗体 。优化反应条件，确定包被抗体、检测抗体及酶标抗体 的最佳工作浓度，进行敏 感性 、特异性、重复性及稳定性分析 ，并与斑点 ELISA、H5N1多重 RT—PCR或病毒分离鉴定的结果相比较 ， 同时使用该方法对野外样品进行 了检测。结果表 明，该方法敏感、特异，具有 良好的重复性和稳定性，可用于 检测临床样品、鸡胚培养物及细胞培养物 中的H5亚型禽流感病毒。 关键词 ：禽流感病毒；H5亚型特异性；抗原捕捉 ELISA Analysisofviralreact0genicitydifferenceand developmentofH5 subtype-specificELISA forthedetectionofavianinfluenzavirus SONG Jian—ling。，ZHANG Wen—dong ，ZHANG Fu—qiang。，IIZuo—sheng。，FENG Zi—liang。，IU Yue， YUE Liang ，WANG Jin-ping ，HU Yuan—yuan。，ZHANG Ying—guo ，FAN Quan—shui。，QIU We ， (1．YunnanTropicaland SubtropicalAnimalVirusDiseasesLaboratory，Kunming650224，China；2．Yunnan ProvinceCentreforPreventionandControlofAnimalDiseases，Kunming650051，China；3．Chengdu MilitaryRegion’sCentreforPreventionandControlofDiseases，Kunming650032，China) Abstract：BasedonthepolyclonalantibodyandH5subtype—specificmonoclonalantibodyagainstavian influenzavirus(AIV)，anantigen captureELISA (AC—ELISA)specifictoH5subtypeAIV wasdeveloped． TheH5subtype—specificmonoclonalantibodywithhighspecificityandsensitivitywasselectedbyanalysis ofreactivitydifferencebetweendifferentmonoclonalantibodiesordifferentisolatesofAIV．Thereaction conditionandtheworkingconcentrationsofcoatingantibody，detectionantibodyandenzyme—labeledanti— bodywereoptimized，andtheassay’Ssensitivity，specificity，repeatability，stabilitywereanalyzedand corn— paredwiththoseofDot—ELISA 。H5N1multiplexRT—PCR and thevirusisolation andidentification．The resul