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某结核研究实验楼空气中结核分枝杆菌的调查研究 郑小凌 钟昱文 王雅静 韩春华 王冰姝 陈惠珍韩佳音邹钦 广东省疾病预防控制中心，广州510300 摘要 目的 调查2级结核实验室空气中结核分枝杆菌(MTB)污染状况，评估实验室生物安全。方 法 用罗氏培养基平板对实验室各区域进行空气采样，37℃培养8周，阳性培养物用抗酸染色和MTB核 酸检测作鉴定，分析结果。结果 洁净区未检出MTB，半污染区检出2株MTB，污染区检出10株MTB。 含MTB活菌操作和人员活动频繁的实验区域空气MTB污染较为严重，实验人员不规范的工作方式也 影响实验室空气MTB的污染。结论 结核实验区域存在MTB空气污染，实验人员应规范实验操作，做 好生物安全防护。 结核分枝杆菌；空气污染；生物安全 1．4．1采样对洁净区的学习室、半污染区的流式细胞室和蛋白质研究室、污染区的各室共12个房间 及中央走廊采用自然沉降法进行空气采样，在每个待采样房间沿对角线分别放置3个无菌罗氏固体平板 培养基(其中标本前处理室因空间较大，共放置6个平板)，中央走廊贯穿实验室全层，按每隔10米为采 样点放置培养平板。做好标记，打开平皿上盖，使培养基暴露空气约30分钟，盖好平皿。将所有平板 倒置于37℃培养箱培养8周。 1．4．2培养物鉴定从平板上挑取凸起、干燥、菜花状或颗粒状的培养物进行涂片、抗酸染色和显微 镜镜检，显微镜下发现有红色棒杆状细菌即为抗酸杆菌阳性，简称涂阳。记录镜检结果。涂片、染色 和镜检方法参照《结核病诊断实验室检验规程》进行。 13000 测试剂盒自带)40ul，100C裂解菌体lO分钟，rpm离心10分钟，上清液即为DNA模板。根据试 仪进行上机扩增，具体参数和程序参照试剂盒操作说明进行。扩增结果的判断：Ct值437为结核分枝 则判定为结核杆菌阳性。 2结果 共放置平板42个(洁净区3个，半污染区6个，污染区27个，中央走廊6个)，有菌生长平板20+， 有菌生长的平板中，菌落数几乎都为1．2个cf-u／平板，共分离出可疑分枝杆菌菌落14个，这14株可疑菌 落经涂片镜检均为抗酸染色阳性菌，这些涂阳菌经结核分枝杆菌DNA检测鉴定，结果为：12株结核分 枝杆菌，2株非结核分枝杆菌属(未鉴定到种)。12株结核杆菌分布在半污染区(2株)和污染区(10株)， 结果详见表1。 3讨论 结核杆菌因其呼吸道传播的特性，常让从事结核诊疗和研究工作的专业技术人员处于职业感染甚 至发病的高风险状态。某结核病医院曾对85名该院在职职工进行皮肤PPD试验，阳性率为76．4％， 其中强阳反应占37．6％[11，如此高的结核隐性感染率，主要是由这些医务人员长期接触含大量结核菌 的环境造成的。1979年至1999年间，在国内外有报道的实验 表l结核实验楼各实验区域空气结核杆菌检出情况 缓 室感染病例统计中，发生结核感染发病病例达223例，在各类病原体引发的实验室感染中位居首位 12]，对实验人员的生物安全防护构成极大的威胁。依据我国《病原微生物实验室生物安全管理条例》 和《实验室生物安全通用要求》的规定，结核杆菌属于生物危害3级，对结核菌大量活菌操作须在符合 生物安全3级(BSL．3)的环境中进行。若实验室设备达不到BSL．3级别的，必须配置11级生物安全柜才能 进行活菌操作。目前国内大部分结核专科医院的研究实验室为BSL．2实验室，实验条件较10多年前有很 大的改善，但BSL-2实验室的生物安全防护级别离3级防护毕竟有一定差距，实验人员的自身防护仍然 面临较大的考验。了解实验室的空气污染状况有利于实验人员更有针对性地做好生物安全防护，更好 地完成工作。 本实验的研究对象正是BSL-2实验室，实验发现该实验楼空气结核杆菌污染有以下几个特点：(1) 在该实验楼全层各区的空气中检出的12株结核分枝杆菌均分布在半污染区和污染区。半污染区2个房 间放置的6个平板中，只有蛋白研究室中的1个平板分离出2株结核杆菌，后经分析发现部分实验人 员从污染区做完实验后习惯到此室将内层工作服脱下。并将工作服悬挂于该室墙壁。(注：在污染区操 作的实验人员身穿两层工作服，外层为隔离衣，内层为自大衣和白长裤。从污染区退出至半污染区时 必须脱