机械刺激在间隙连接半通道活动中作用.pdfVIP

生物物 理学报 第十六卷 第三期 二000年 九月 ACTA B1OPHYS1CA SINICA Vo1．16 No．3 Sept．2．000 ／ 机械刺激在 间隙连接半通道活动 中的作用 R 玉 ! 。 ud— D snerid 1 北京大学生命科 学学 院生物膜 与膜工程 国家重点实验 室 ． 北京 100871： 2 DepartmentofGeneticsand Cel【Bio[ogy CoLlege0 BioiogicalSciences UniversityofM inN~8ota．StPau[，M N ．55108，USA) 摘要 ：研 究 了机械刺激时细胞膜 的间隙连接 半通道 的作用。采 用 了单滴霹液从不 同高度 自由 落下时对细胞表面 的冲击作为机械刺激 单滴染料 +EGTA从 不同高度藩下冲击细胞时．细胞 的染 料 负荷随刺激高度 的增加 而加强 。只用染料而无 EGTA 时，只有很 少量细胞撮取染料 。说 明EGTA 的存在有重要意义 燕而 ，从培养皿边缘缓慢加凡 5(6) rb0xy玎_】1【rescejn (简称染料)+EGTA 溶液 ，避免机械刺激 时，所有 垂咛胞均无染料 负荷 。说 明有无机械刺激曼一个 关键 蒂件 。培予单滴培养 液冲击 ，然后从培养皿迫缘补充染料 +EGTA．刖细胞 的染料 负荷随机 械刺激 的增强而加 。l2一O— tetradecony[phorba】一13一acetae【 (TPA)是一种敢癌物质 ，它能促进 蛋 白激 酶 c活动 ，井可明显 抑制 间隙连接 的通逢性 。在它的北理下，能明显抑制细胞 的染料撮取 。 上结果表 明，机械刺激是使 半通道开放 的启动 因素 ，而 EGTA别进一步促使其 开放 。 关蕾词 Cx43转染的 堑些；芝茎垫璺；垫熊主 盟蓝盘 5(6)一carboxyf】uoresceJn：EGTA； l2—0一tetradeconylphorba1—13一acetate 中围分类号：Q27 文献与标 识码 ：A 文章编号 ：1000—6737(2000)03—0468—07 细胞 间通信是一个在进化上很古老 的功能 ．而其结构 间隙连接 (gap junction)则在形 态上 是一个古 老 的结构 ：然 而它并没 有在进 化过 程 中消失 ，而是随着进 化不 断发展 。对于它 的 研究可追朔到 50—60年代 ，到 目前 ，它 已经是一个重要 的研究领域 ，受到广泛的重视 。 由于 间隙连接是 由对应细胞 的两个 半通道 相接 而成 ，因此 ，研究 间隙连接半通道 (简称半 通道 )的活动是近年 来在 细胞间通讯研究 中的一个 新进展 构成半通道的连接蛋 白(Cx)在 细 胞 内形成 ，并可在非连接部位的细胞膜 上测 出 ．因此 有理 由推测 ，这种 由连接蛋 白形成的半通 ， 道保持着关闭状 态 ，以避免细胞 质 与其周 围环境进 行分子交换 ，否则将引起 细胞 的损 伤 实 际 上 ，在正常情 况下 ．细胞膜 上 的半通道是保 持关 闭的 ，而极不容易开放 。细胞 外的染料 ，例 如 LuciferYellow ，就不 能弥散进 人细胞 ；同时注 人到细胞 内的染料也不 能 自由外逸 …。然而 ， 在特殊 条件下 ，半通 道 可 以被激活 ，导致 分子通 过该 通道进 出细胞 。 首先 ，在鲶鱼 (catfish)视 网膜 的单个水平 细胞 上有 人报道 了半通道的活动”。。在 全细胞钳 制条件 下 ，降低细胞 外的 cd 浓度 观察 了该细胞 的膜 电流 作 为 间隙连接 活动 的强抑制 因素 的细胞 内酸化 可抑制该 电流 ，而多 巴胺也有 同样作 用 。LuciferYellow 在低 【CaH 】。时可进 入 单个水平 细胞 ，而 这一活动可 由多巴胺所 阻断 。所有这些 结果表 明，半通道 ，即间隙连接 的一 半 ，起关键 的作用 。 收稿 日期 ：I999—11一I7 基金 项 目：中 国国家 自熬 科学 基 金 及美 国 NIH 基金 支持 项 目 作者筒介 ：刘泰槽 教授 ，电话 ：(010E—mai【：swltf@p