拉曼镊子结合多元统计方法分析两种人体滴虫差异性.pdfVIP

第39卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第4期 2011年4月 ChineseJournalof 521～527 AnalyticalChemistry 拉曼镊子结合多元统计方法分析两种人体滴虫的差异性 黄庶识1’3 赖钧灼1 梁裕芬圯 韦俊彬2 1(广西科学院生物物理实验室。南宁530003)2(广西中医学院基础医学院，南宁530001) 3(昆明理工大学生物工程技术研究中心，昆明650224) 摘要 应用单细胞激光拉曼光谱分析技术，对不同来源的阴道毛滴虫和171腔毛滴虫的拉曼光谱数据进行 减背景、平滑、基线校正、归一化等处理后做主成分分析(PCA)和辨别函数分析(DFA)等多元统计分析。平均 光谱和PCA分析结果表明，阴道毛滴虫和口腔毛滴虫差异最为明显是1002cm_1峰，其次，差异相关性最大的 还有9个拉曼谱峰785，888，979，1127，1287，1317，1364，1446和1465cm～，其中4个峰来自核酸，6个峰归 属于蛋白质信号峰，反映两种滴虫的蛋白质、核酸的相对含量差异较大，可以通过PCA方法鉴别两种毛滴虫 的差异。由于口腔毛滴虫或阴道毛滴虫虫株间差异并不明显，应用PCA结合DFA多元统计学方法，在保留 原有数据信息基础上，通过扩大组间差异，缩小组内差距，同种毛滴虫虫株间在一定程度得到区分。口腔毛滴 虫4个虫株之间有12个峰是差异最大的谱峰，阴道毛滴虫4个虫株之间有14个峰是差异最大，反映了两种 毛滴虫虫株之间核酸、蛋白质、脂类及糖类等生物大分子组成相对含量差异。此外，根据DFA中虫株间欧氏 距离聚类，可以确知虫株之间的差异。 关键词 口腔毛滴虫；阴道毛滴虫；拉曼光谱；多元统计分析 1 引 言． 口腔毛滴虫(Trichomonastenax，TT)是与人体口腔疾病，包括牙龈炎、牙周炎和龋齿等密切相关的 病原虫；阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis，TV)是一种引起男、女泌尿生殖系统炎症、新生儿肺炎、支气 管炎及口腔损害的病原虫。口腔毛滴虫和阴道毛滴虫均为单细胞动物，形态结构非常相似，呈倒梨形， 平均体长约10um，有鞭毛，两种滴虫在显微镜下使用传统的生理盐水涂片法或涂片染色法不易鉴别。 流行病学研究发现，来源于不同地域的阴道毛滴虫或口腔毛滴虫虫株的形态相同，但在致病力、抗药性、 抗原性等生物学特性不同；同工酶酶谱分析表明，滴虫种间、虫株间显示出多型性，表现为条带数和带型 的不同，证实阴道毛滴虫虫株间存在种内多态性“’2l。总蛋白、蛋白水解酶、针对表面抗原的单克隆抗 体、多糖成分和可溶性抗原成分的理化分析发现，滴虫虫株间的蛋白质、糖分等组分上存在一定差 异13,4]，反映不同地域阴道毛滴虫和口腔毛滴虫虫株间在生物学性状方面及表型上是有差异的。 拉曼光谱可以表征物质结构及构象，反映样本中所含物质分子组成、结构及含量差异的信息，因此 拉曼光谱技术是研究物质分子结构的有效工具。核酸、蛋白质、脂类及糖类等生物大分子均能产生特征 性的拉曼光谱。因此，从细胞的拉曼光谱中可以获知构成细胞的这些生物大分子的组成、结构及生理状 态等重要信息9】，从而可以对细胞的组分差异进行有效分析。近些年发展起来的单细胞激光镊子拉曼 光谱技术(LTRS)是将光学囚禁(Opticaltrapping)与拉曼光谱分析(Raman 浮细胞、细胞器、大分子颗粒研究的一项生物光子技术。目前，该技术已应用于芽孢、细菌、动物细胞，酵 母细胞等单细胞以及染色体、线粒体等亚细胞器的研究伊121。 本研究利用单细胞光镊拉曼光谱系统对阴道毛滴虫和口腔毛滴虫的单个活体虫体进行拉曼光谱分 析，并结合多元统计分析方法对收集的拉曼光谱进行统计分析，判别两种滴虫及其虫株之间的差异，从 单个细胞水平上提供一种分析活体滴虫虫株间组分差异的方法。 2010-07-01收稿；2010-09-24接受 本文系广西自然科学基金项目(No．0728177)和广西中医学院自然科学研