利用酵母双杂交系统筛选甘蓝型油菜ATP6相互作用蛋白质.pdfVIP

2010年 7月 四川大学学报 (自然科学版) Ju1．2010 第47卷 第4期 Journa1ofSichuanUniversity(Natura1ScienceEdition) Vo1．47 No．4 doi：103969／j．issn．0490—6756．2010．04．041 利用酵母双杂交系统筛选甘蓝型油菜 ATP6的 相互作用蛋 白质 孙 力 ，李娜娜 ，余 渝，柴 靓 ，王健美，杨 毅，李旭峰 (四川大学生命科学学院生物资源与生态环境教育部重点实验室，成都 610064) 摘 要 ：通过酵母双杂交系统，以ATP6作为诱饵蛋 白筛选与ATP6有相互作用的蛋 白质．通 过筛选和鉴定，获得 了5个与ATP6有相互作用的蛋 白质．其 中一个与拟南芥 中内质网膜上的 蛋白转运复合体 中的 口亚基 (Sec61a)有很 高的相似性．通过 TAILPCR和设计 简并 引物扩增 初步得到 了甘蓝型油菜 Sec61a全长基因组序列和 cDNA序列．并利用生物信息学分析手段对 甘蓝型油菜Sec61a进行 了比对和分析 ，推测该蛋白质可能参与了花粉的发育过程． 关键词 ：ATP6；酵母双杂交；细胞质雄性不育；Sec61a；TAILPCR 中图分类号 ：Q78 文献标识码 ：A 文章编号 ：0490—6756(2010)04—0899—07 ScreeningofproteinsinteractingwithATP6inBrassica napusbyyeasttwohybridsystem SUN Li，L Na—Na，yU Yu，CHAILiang，WANGJian—Mei，YANG ，L Xu—Feng (KeyLaboratoryofBio—ResourceandEco—EnvironmentofMinistryofEducation， CollegeofLifeSciences，SichuanUniversity，Chengdu610064，China) Abstract：Yeast—Two—Hybrid—System wasemployed，withATP6 asabaitprotein，to screen proteins whichwouldinteractwithATP6．Fivepositiveproteinswereobtainedandoneofthem wasfound to havehighsimilaritywithputativeasubunitofproteintranslocationcomplex (Sec61a)inendoplasmicre— ticulum ofArabidopsisthaliana．Then，TAIL PCR andgradationPCR withdegeneratedprimerwere usedtoamplifythecompletecDNA andgenomicDNA sequenceswhichwereanalyzedbymeansofbioin— formatics，inferringthatthisproteinmaybeinvolved inthedevelopmentofpollen． Keywords：ATP6，Yeast—Two—Hybrid，CM S，Sec61a，TAIL PCR 具有很高的实用价值．油菜 (BrassicanapusL．)是 1 引 嗣 世界上重要的油料作物之一 ，对于油菜 中雄性不育 细胞质雄性不育 (cytoplasmicmalesterility， 的研究有重大意义[1]．到 目前为止越来越多的研究 CMS)是广泛存在于高等植物中的一种 自然现象 ， 表明线粒体 DNA(mitochondria1DNA，mtDNA) 表现为母体遗传 、花粉败育和雌蕊正常