反相高效液相色谱法测定食品中的八种抗氧化剂.docVIP

反相高效液相色谱法测定中种抗氧化剂 孟 磊 谢黎霞苏 惠 （河南农业大学理学院，郑州 450002） 中图分类号：O657.7　 文献标识码： A 文章编号： 饼干是一类油脂含量高的食品，其不可避免地受到油脂氧化而导致的酸败变质的威胁，添加抗氧化剂是最直接最有效的方法。但抗氧化剂过量，会损害人体健康，如2, 6- 二叔丁基对甲酚（BHT）有可能抑制人体呼吸酶活性，叔丁基对羟基茴香醚（BHA）大剂量使用有致癌作用，PG 对肾脏有损害，儿童正处在身体发育期，摄入过量的话将对产生严重的不良后果。世界卫生组织（WHO）和联合国粮农组织专家委员会（FAO）进行的安全评估认为，叔丁基对苯二酚（TBHQ）单用或合用最大使用量为0.2g/kg，我国《食品 收稿日期 基金项目：郑州市科技攻关项目） 添加剂使用卫生标准》（GB 2-2011）规定：BHA、BHT、TBHQ可用于食用油脂、油炸食品、干鱼制品、饼干、方便面、速煮米、果仁罐头、腌腊肉制品中残留不得超过0.2g/kg。日本食品法规定，禁止在任何食品中TBHQ。 我国对油脂及其制品中抗氧化剂的测定一直沿用薄层色谱法、比色法和气相色谱法，对于抗氧化剂的测定多采用高效液相色谱法液质] ，]，气相色谱与质谱联用法测定食品、化妆品中[]数种防腐剂的测定也有报道。但这些方法提取溶剂采用正己烷和，提取产率不高。（SN/T1050-2002）针对上述情况，研究了测定中抗氧化剂的高效液相色谱法。该法以为提取溶剂，水（0.5%甲酸）-乙腈（0.5%甲酸）溶液为流动相，选择八种抗氧化剂溶液的最佳吸收波长280nm为检测波长，采用梯度洗脱的方法进行检测法克服了其它波长对不同组分进行检测时对检测灵敏度的影响，同时还可减少其它波长一些可能存在的共存物的干扰，采用梯度洗脱的方法使不同组分有效分离。1 试验部分 1.1仪器与试剂Waters 2695 Separations Module 高效液相色谱仪UVD170U紫外检测器KQ-250E型医用超声荡仪高速离心机混合标准储备溶液：称取没食子酸丙酯（PG）、叔丁基对羟基茴香醚（BHA）、2, 6- 二叔丁基对甲酚（BHT）、没食子酸辛酯（OG）、没食子酸十二脂（DG）、正二氢愈创酸（NDGA）、叔丁基对苯二酚（TBHQ）、2,6-二叔丁基-4-甲氧基苯酚（Ionox-100）抗氧化剂标准品50.0 mg，加少量乙腈溶解后，用乙腈定容至50mL，摇匀，配制成1.0g·L的标准储备液，℃冰箱保存。使用时。 甲酸分析纯；乙腈色谱纯水纯净水 1.2 色谱条件 Waters Sunfire色谱柱(3.9 mm×150mmμm); 柱温30℃进样量20μL流动相：A甲酸(0.5)溶液，B甲酸乙腈(0.5)溶液；梯度洗脱：0～5minA为65%；5～16min65%降至36%，16～24minA由36%降至2% ；流0.6mL·min-1；检测波长280nm 1.3 试验方法 随机购买种不同品牌的饼干，研碎，称取研碎的样5g，加入20mL搅拌使其充分溶解，重复2次，合并滤液，超声振荡30min，以3 000 r·mn-1转速离心10 min，取上层清液用0.45μm有机系微孔过滤膜过滤。 2 结果与讨论 2 .1提取溶剂的选择(1+1)混合溶液 和二氯甲烷分别作为提取试剂的提取效果。结果表明(1+1)混合溶液、二氯甲烷对OG、NDGA的提取效果较好，甲醇作为提取试剂。 2.2 洗脱程序的选择 分别采用无梯度的甲酸（0.5）甲酸乙腈（0.5）梯度的各个峰的分离效果无梯度的甲酸（0.5）甲酸乙腈（0.5）作流动相洗脱，难以在较短的时间内使各个峰彼此完全分开因OG与lonox-100、BHT与DG保留特性相似采用有梯度的作流动相各个峰的分离效果较好，满足同时准确定量的要求。因此，试验选择梯度洗脱的方法进行验g·L-1的 时间/min (a) 1——PG；2——TBHQ；3——NDGA；4——BHA； 5——OG； 6——.Ionox-100；7——DG；8——BHT (b) 1——TBHQ；2——OG 图1. 50mg·L-1标准品色谱图（a）和样品溶液色谱图（b） Fig 1. HPLC chromatograms of 50 mg·L-1 standard solution (a), sample (b) 2.3 标准曲线和检出限 按试验方法对0.1,1,2,5,10 mg·L-1的混标溶液，曲线，其线性回归方程及相关系数见表1。在0.10～10g·L-1范围内线性，检出限为0.05g·L-1。 表1. 8种抗氧化剂的曲线和检出限 Table