家蚕经芸香苷诱导后合适的参照基因表达谱研究.pdfVIP

国蚕学会第七届青年学术研讨会论文集 家蚕经芸香苷诱导后合适的参照基因表达谱研究 1 1 1 1，2 1，2 1，2 吴玉 张婷 赵国栋 卫正国 李兵 沈卫德 1 2 （苏州大学基础医学和生物科学学院，江苏苏州 215123；苏州大学蚕桑研究所，江苏苏州 215123） 摘要：实时荧光定量 PCR ( real-time quantitative PCR, qPCR ) 因灵敏度高，定量准确等特点，已广泛应用于基因表达 分析。利用合适的参照基因对 qPCR 数据进行校正处理是确保该方法分析准确性的关键。本实验首先分别用三种浓 度的芸香苷溶液添食家蚕，通过检测家蚕谷胱甘肽-S-转移酶基因d 1( BmGSTd1 )的诱导转录水平，分析得出浓度为 -2 5×10 ng/µL的芸香苷溶液能起到显著的诱导作用；为了选出适用于家蚕诱导实验 qPCR 分析的合适参照基因，测 -2 定了BmGSTd1在正常饲养及添食芸香苷（5×10 ng/µL ）后在 肠和脂肪体 的转录水平，分别用两种内参基因( Actin3 , GAPDH )和加入外源参照基因( IFP2 )对qPCR数据进行标准化，结果发现内源和外源基因标准化的结果差异很大；最 后测定三种内参基因的诱导转录水平，结果显示，二者在两种组织中的诱导转录水平均有较大变化。分析比较这些 结果表明，管家基因在诱导后的表达不再恒定，而外源基因则不受实验条件的影响，能保证定量结果的准确性。选 择加入外源参照基因对 qPCR 数据进行归一化处理，是家蚕诱导实验 检测基因表达的合适方法。 关键词：实时荧光定量PCR；家蚕；参照基因；芸香苷；诱导 Appropriate reference genes for use in expression profile studying, the effects of rutin, in silkworm, Bombyx mori Abstract: Due to the high susceptibility and accuracy, real-time quantitative PCR (qPCR) has been widely used in gene expression analysis. Using appropriate reference gene for real-time qPCR data is the key to ensure the accuracy of analysis. In this study, we detected transcription levels of BmGSTd1 in midgut and fat body from fifth instar Bombyx mori larvae treated with three different concentrations of rutin, respectively. We found BmGSTd1 was clearly up-regulated by the -2 5×10 ng/µL rutin. In order to select suitable reference gene for the induction experiments in B.mori, the transcription levels -2 of BmGSTd1 in different tissues of B.mori treated with rutin (5×10 ng/µL) were de