2014年基因工程2—工具酶(中国药科大学生物工程所有课件).pptVIP

第二节 基因工程的工具酶 一、细菌的限制—修饰作用和限制性内切酶的发现 即限制性内切酶和与其对应的甲基化酶系统，称R-M system 限制性内切酶识别特异的DNA序列并打断DNA，同时对应的甲基化酶能把该段特异的序列甲基化，使得限制性内切酶无法识别。 这种系统在细菌中起到了免疫的作用，即外来入侵的DNA在限制性内切酶的作用下被水解，而细菌自身的DNA在甲基化酶的作用下被保护起来。 1. 来源 （1）限制（Restriction） （2）修饰（Modification） 三、限制性内切酶的命名 四、限制性内切酶的类型 1. I类限制性内切酶 （2）切割位点 I类酶与DNA识别位点结合依赖于M亚基与辅助因子S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的相互作用，后者通过变构作用使酶处于活性状态。 酶分子与识别位点结合之后，根据该位点的甲基化状态发挥相应的酶活性，或限制、或修饰、或既不限制也不修饰。 I类酶的切割位点与识别位点通常相距1,000-5,000bp，切割位点的序列并不表现出严格的特异性，两条DNA链上的断裂位点相距70-75个核苷酸，因此切开的DNA分子末端是单链形式。 II类限制性内切酶 绝大多数的II类酶均在其识别位点内切割DNA，切割位点可发生在识别序列的任何两个碱基之间。一部分酶识别相同的序列，但切点不同，这些酶称为同位酶（Isoschizomers），其中识别