第十二章配子与胚胎生物技术.docVIP

第八章 配子与胚胎生物技术 第一节 胚胎移植技术 一、概 述 （一）概念（记忆，P253） 胚胎移植（embryo transfer，ET）：又称借腹怀胎，受精卵移植。它是将体内（优秀母畜）、外生产的哺乳动物早期胚胎（一般情况下所移植的不是受精卵，而是发育至多细胞、桑椹胚或胚泡阶段的胚胎），（如果是体外内胚胎用手术或非手术的方法取出，在显微镜性下检出后），移植到同种的生理状态相同的雌性动物生殖道内，使之继续发育为正常个体的生物技术。 提供胚胎的个体——供体（donor） 接受胚胎的个体——受体（recipient） (超数排卵和胚胎移植通常同时应用，合称超数排卵和胚胎移植（multiple ovulation and embryo transfer，MOET），简称MOET技术（记忆，P209） （二） 发展历史（熟悉，P209-211） 1、试验研究阶段 2、实际应用阶段 3、产业化阶段 （三）胚胎移植在畜牧业生产上的意义（P256，记忆） 1、提高良种母畜繁殖力； 2、简化良种引进方法； 3、降低种质资源保护利用； 4、加速育种进程； 5、利于防疫； 在养猪业中，为了培育无特异性病原体(SPF)猪群，向封闭群引进新的个体时，作为控制疾病的一种措施，采用ET技术剖腹取仔的方法。 6、促进生殖生理理论与胚胎生物技术的发展 二、ET的生理学基础与基本原则 （一）生理学原理（书P212，记忆） 1、母畜发情后生殖器官的孕向发育 母畜发情后数日甚至10余日内，生殖系统的变化相同，即在相同的时期，生理状态一致，子宫内的环境相同。 2、早期胚胎的游离状态 游离状态是胚胎采集、保存、培养和体外操作等重要理论基础。 3、子宫对早期胚胎的免疫耐受性 即胚胎移植不存在免疫问题。 4、胚胎遗传物质的稳定性 胚胎的遗传特性不受受体母畜的影响。 （二）ET遵循的基本原则（P212-213，记忆） 1、 胚胎移植前后所处环境的同一性 （1）供体和受体在分类学上的属于同一物种； （2）胚胎发育阶段与受体发情时间上的一致性； （3）胚胎发育阶段与受体生殖道解剖位置的一致性。 2、胚胎发育的阶段。 ET时间应在妊娠时别发生之前，通常在供体发情配种后3~8d内收集胚胎，受体也在相同时间接受ET。 3、胚胎的质量。 保证质量。 4、经济效益或科学价值。 供胚应具独特经济价值，而受体要求生产性能一般，但繁殖性能良好，环境适应能力强。 （三） ET应具备的条件（熟悉，P213） 1、实验室条件 2、技术条件 3、胚胎来源 二、胚胎移植的技术（记忆） （一）供、受体母畜的选择（P214） 1、供体母畜 健康，较高育种价值，生殖机能正常，已证明对超排反应较好。 2、受体母畜 健康、繁殖性能良好，体型较大。 （二）受体母畜的同期发情（P214） 同第四章第七节 （三）供体母畜的超排（P214-216） 1、超排方法（前已说） 2、提高超排效果的措施（选择对象、规范化管理、优质药品） （四）供体母畜的配种（P216） 适当的时间，优质精液对供体母畜进行输精。使用密度大、活率高的精液输精，输精次数2-3次，间隔8-10h。 （五）胚胎采集（冲卵）（P216-219） 定义：是利用特定的溶液和装置将早期胚胎从母畜 子宫或输卵管中冲出并回收利用的过程。 1、冲胚液的配制与灭菌：含5%犊牛血清的杜氏磷酸盐缓冲液（D-PBSS）。 2、冲胚器械用途和准备 （1）二路式或三路式冲胚管； （2）外科手术器械。 （3）保定架 （4）必备药品 3、供体母畜的检查与处理 供体牛在发情的第5-6d通过直检卵巢上黄体数，确定进行冲胚处理的牛的头数。两侧上有2个或2个以上的黄体才冲胚，冲胚时间在发情第7d进行。 4、胚胎的收集（时间、方法） 胚胎收集时间（记忆）： 配种后3－8d后，发育至4-8细胞胚以上为宜（大多数动物） 或桑葚胚或早期囊胚（配种后6-8d）（牛和水牛） 收集胚胎的方法（记忆） （1）手术法（小动物和实验动物） 在腹中线处作一切口，然后将子宫角和卵巢一起拉出，检查排卵点或血红体数量。冲胚方式采取：输卵管采胚法（于羊和兔）；子宫角采胚法（于羊、猪和兔等） （2）非手术法收集胚胎（大家畜） 麻醉、消毒→直肠把握→充气→灌流冲胚液 →消毒生殖道用含抗生素的生理盐水冲洗→2d后消黄 （六）胚胎的检查 胚胎的检查：是指在体视镜下从冲卵液回收胚胎，同时间差胚胎数量和质量。对发育正常的胚胎供移植或体外培养和保存。 胚胎的鉴定：指应用各种手段对胚胎质量和活力进行评定或等级分类。形态学上可分为A、B、C、D或1、2、3、4。还有体外培养法