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SFRP4过表达对结肠癌细胞株HCT116基因表达谱的影响 复旦大学附属肿瘤医院病理科 黄 丹 研 究 背 景 研究背景 Wnt信号通路 分泌型卷曲相关蛋白SFRP 一组分泌型糖蛋白家族 SFRPs有五个家族成员在人类组织中表达 定位于染色体8p 12～11.1 包括一个特有的同源半胱氨酸富含域（CRD）的N-末端和一个C-末端。 （除SFRP3以外） 分泌型卷曲相关蛋白SFRP 通过与Wnt信号的蛋白质相互作用以阻止它们结合到Fz蛋白或与Fz形成无功能复合物而阻碍Wnt信号 研 究 目 的 技术路线 结果 pcDNATM 3.1-SFRP4质粒的构建及稳定转染株的鉴定 芯片生物信息学分析 RT-PCR验证部分基因芯片的结果 pcDNATM 3.1-SFRP4质粒的构建及稳定转染株的鉴定 芯片生物信息学分析 RT-PCR验证部分基因芯片的结果 pcDNATM 3.1-SFRP4质粒的构建及稳定转染株的鉴定 芯片生物信息学分析 RT-PCR验证部分基因芯片的结果 讨论 我们通过基因芯片技术对基因组进行高通量的研究，通过生物信息学分析，我们筛选出比较重要的p38MAPK信号通路相关基因、TNF家族基因和凋亡有关基因的变化来探讨SFRP4对肿瘤细胞的作用机制。 讨论 MAPK信号通路参与细胞增殖、分化及凋亡的调控，并在细胞恶性转化的病理过程中发挥重要作用 肿瘤坏死因子（TNF）家族是一类具有广泛生物学活性的分子，具有抗肿瘤、调节细胞生长分化等作用。它能直接抑制肿瘤增殖和诱导凋亡，有较强抗肿瘤的作用 结直肠癌细胞表达SFRP4后，促进凋亡和抑制凋亡的因子同时发生改变，提示其对凋亡的调控是一个复杂的过程。 谢谢！ * CA Cancer J Clin. 2008; 58: 161-179 结直肠癌的发病率 研究背景 研究背景 研究背景 检测SFRP4基因转染肠癌细胞株HCT116后基因表达谱的变化，深入探讨SFRP4在结直肠癌发生中的作用机制。 pcDNATM 3.1-SFRP4重组质粒 基因芯片检测（Pathway分析） 双酶切鉴定 WB鉴定SFRP4表达 转染HCT116后 筛选稳定表达株 pcDNA3.1载体大小为5500bp， SFRP4基因片段大小为1056bp EcoRI和HindIII双酶切重组质粒后凝胶电泳图 Western Blot 检测pcDNATM 3.1-SFRP4质粒稳定转染HCT116细胞后SFRP4的表达 0道为pcDNA3.1空载体，1和2道为pcDNA3.1-SFRP4 3.0 蛋氨酸脑啡肽 MEK NM_021284 2.3 MAPKK1相关蛋白1 MAP2K1IP1 NM_021970 2.8 MAPKKKK1 MAP4K1 NM_007181 2.3 MAPKK3 MAP2K3 NM_002756 5.0 丝裂素活化蛋白激酶相关蛋白1 MAPKAP1 NM_001006617 4.3 丝裂素活化蛋白激酶3 MAPK3 NM_001040056 Induction-fold Comments Gene name GenBank ID 上调的MAPK家族基因 下调的TNF家族基因 0.5 肿瘤坏死因子受体超家族10D TNFRSF10D NM_003840 0.44 肿瘤坏死因子受体超家族10A TNFRSF10A NM_003844 0.25 肿瘤坏死因子，alpha-诱导蛋白8 TNFAIP8 NM_014350 0.38 肿瘤坏死因子，alpha-诱导蛋白3 TNFAIP3 NM_006290 0.25 肿瘤坏死因子，alpha-诱导蛋白2 TNFAIP2 NM_006291 Induction-fold Comments Gene name GenBank ID 凋亡相关基因的改变 0.13 Bcl2-L11 BCL2L11 NM_006538 2.6 TNF受体超家族成员6 FAS NM_000043 4.9 胰岛素样生长因子受体 IGF1R NM_000875 Induction-fold Comments Gene name GenBank ID 1，细胞转染SFRP4前；2，细胞转染SFRP4后。 β-actin作为对照。 RT-PCR验证基因芯片结果