生物化学技术6 凝胶过滤11.pptVIP

各组分间的 值差异越大，分离效果越好； 差异越小,则分离效果很差，或根本无法分离 流出物用部分收集器等量或等时收集，检测后分段合并相同组分的各管流出物，得到分子量不同的各种组分 1、当Kav=0时，则Ve=Vo ，即对于根本不能进入凝胶内部的大分子物质全排阻，洗脱体积等于空隙体积即外水体积（图中组分Ⅰ） 2、当Kav=1时，Ve=Vo+Vi 。即小分子可完全渗入凝胶内部时，洗脱体积应为空隙体积与内水体积之和。Ve=Vo+Vi （图中组分Ⅲ） 3、当0＜Kav＜1时，Ve=Vo+ Kav（Vi ＋ Vg ）。表示固定相中只有一部分可被组分扩散渗入，一部分被排阻，Ve即在Vo与Vo+Vi＋Vg之间变化（图中组分Ⅱ） 4、有时Kav＞1，表示凝胶对组分有吸附作用 （从内水中洗脱出来的含量下降），此时Ve＞Vo+Vi＋Vg。例如一些芳香族化合物如苯丙氨酸，酪氨酸和色氨酸等在Sephadex G-25中的洗脱体积远超出理论计算的最大值 二、 值的测定 只要测出 、 和 ，即可计算出 值 的测定：（1）计算法： （2）测定法： 的测定：用蓝色的葡聚糖2000（M=200万），在Sephadex中被完全排阻，并借助其本身的颜色，采用肉眼或分光光度计