2009高考生物三轮专题复习教案：实验基础知识方法总结.docVIP

实验基础知识——方法总结 （一）制片技术——制片法1.玻片标本类型： （1）临时玻片标本：是实验中观察标本常采用的方法，保存时间不长久是本法的缺点。如草履虫形态及应激性、口腔上皮细胞、植物细胞质壁分离及复原、洋葱根尖有丝分裂、病原体观察等。（2）永久玻片标本：如洋葱根尖固定装片.蛔虫受精卵固定装片等。2.制片法：中学常用的四种制片法是石蜡切片法（如制作植物茎横断面的切片），涂片法（如制作细菌、酵母菌、口腔上皮细胞临时装片），压片法（洋葱根尖有丝分裂、观察早期花蕾花粉母细胞、洋葱鳞片叶表皮等临时装片的制作），徒手切片法（如桂花叶片横切）。（二）染色及染色剂染色的目的在于使生物组织和细胞受染色剂的作用（化学反应或主动吸收等），其各部分结构能清楚的显示出来，便于显微镜下识别和分析研究。1.染料及染色剂（1）染料：是一类有色的有机物或无机物，它能使被染物呈现颜色。染料的分类有两种，一种是按染料发色机团是阴离子还是阳离子分，是阴离子者为酸性染料，是阳离子者为碱性染料。碱性染料是一种色碱盐，通常为氯化物（如亚甲基蓝）或醋酸盐（醋酸洋红）；酸性染料为色酸盐，通常是钠盐、钾盐、铵盐。另一种是按染色对象分为胞核染料（龙胆紫、醋酸洋红），胞浆染料（红墨水、碘液等），脂肪染料（苏丹、苏丹）等。（2）染色剂：染料溶解在溶剂中而成的溶液。如碘液、醋酸洋红液、龙胆紫溶液、亚甲基蓝溶液、红墨水等。2.染色方法：根据材料是活的还是死的分为活体或半活体染色（如0.01%亚甲基蓝溶液对根染色——根对离子的交换吸附实验、碘液对口腔上皮细胞的染色等）及死体染色（如根尖有丝分裂实验中龙胆紫溶液对已解离的根尖的染色）。3.生物实验中常用的溶液：水、酒精、丙酮、汽油等。4.介绍几种制剂的作用（1）2，4-D生长素类似物：有双重性，低浓度促进生长；高浓度抑制生长；培育无籽果实。（2）10-4M的秋水仙素：a.诱发基因突变。b.使染色体加倍，培育多倍体。c. 单倍体育种，培育纯种。（3）0.9%生理盐水（维持红细胞、口腔上皮细胞形态），10%KNO3溶液（植物细胞质壁分离和自动复原），5%CaCl2溶液和0.01%亚甲基蓝溶液（根对离子的交换吸附），15%盐酸溶液（对根尖解离），丙酮、酒精（溶解色素），层析液（分离色素），龙胆紫溶液、醋酸洋红液（根尖细胞染色体染色），30%蔗糖溶液（植物细胞质壁分离和复原）（4）紫外线：一定剂作为能量、保温，高剂导致细胞基因突变。（三）实验方法：是做好实验设计的关键所在，最常见的经典的实验方法汇总如下：（1）化学物质的检测方法1）?淀粉——碘液2）?还原糖——斐林试剂、班氏试剂3）?CO2 ——Ca(OH)2溶液或酸碱指示剂4）?乳酸——pH试纸5）?O2——余烬木条复燃6）?无O2——火焰熄灭7）?蛋白质——双缩脲试剂8）?染色体——龙胆紫、醋酸洋红溶液9）?DNA——二苯胺试剂10）?脂肪——苏丹或苏丹IV染液——重铬酸钾（酸性条件）12）RNA——吡罗红 13）线粒体——健那绿 （2）?实验结果的显示方法1）光合速率——O2释放量或CO2吸收量或淀粉产生量2）呼吸速率——O2吸收量或CO2释放量或淀粉减少量3）原子途径——放射性同位素示踪法4）细胞液浓度大小——质壁分离5）细胞是否死亡——质壁分离、亚甲基蓝溶液染色6）甲状腺激素作用——动物耗氧量，发育速度等7）生长激素作用——生长速度（体重变化，身高变化）8）胰岛素作用——动物活动状态9）菌量——菌落数或亚甲基蓝溶液褪色程度10）大肠杆菌——伊红-美蓝琼脂培养基（3）?实验条件的控制方法1）增加水中氧气——泵入空气或吹气或放入绿色植物减少水中氧气——容器密封或油膜覆盖或用凉开水2）3）除去容器中CO2——NaOH溶液或KOH溶液4）除去叶片中原有淀粉——于黑暗环境一昼夜5）除去叶片中叶绿素——酒精加热6）除去光合作用对呼吸作用的干扰——给植株遮光7）如何得到单色光 ——棱镜色散或彩色薄膜滤光8）血液抗凝——加入柠檬酸钠9）线粒体提取——细胞匀浆离心10）骨的脱钙——盐酸溶液11）灭菌方法——微生物培养的关键在于灭菌，对不同材料，灭菌方法不同：培养基用高压蒸汽灭菌；接种环用火焰灼烧灭菌；双手用肥皂洗净，擦干后用75%酒精消毒；整个接种过程都在实验室无菌区进行。（4）实验中控制温度的方法1）还原糖鉴定：水浴煮沸加热2）酶促反应：水浴保温3）用酒精溶解叶中的叶绿素：酒精要隔水加热 4）DNA的鉴定：水浴煮沸加热5）细胞和组织培养以及微生物培养：恒温培养，为了测定种子萌发时的呼吸商，现准备了3只玻璃瓶、瓶塞、带刻度的玻璃管、发芽的蚕豆种子、10%的NaOH溶液、NaHCO3、清水等。1号玻璃瓶的实验装置如图所示。 （1）由于发芽蚕豆种子（已消