血清白球蛋白的分离、纯化及鉴定.pptVIP

血清白蛋白、γ-球蛋白的分离、纯化及鉴定 分离纯化的一般程序 实验目的 通过从血清中分离、纯化、鉴定血清白蛋白和γ-球蛋白的实验，培养学生综合应用盐析、离心、色谱、电泳分光等技术来分离纯化特定蛋白质的技能。 实验原理 1. 初分级: 血清经饱和硫酸铵盐析后获得白蛋白粗分离样品和球蛋白粗分离样品。 2. 脱盐:用凝胶色谱法除去分离样品中的盐类。 3. 细分级: 用离子交换色谱法从白蛋白粗分离样品中提取纯化的白蛋白；从球蛋白粗分离样品提取纯化的γ-球蛋白。 4. 鉴定: 用醋酸纤维薄膜电泳进行鉴定。 1. 盐 析 原理: 当高浓度盐存在时，蛋白质往往凝聚并析出沉淀。该技术为“盐析”。 不同的蛋白质在不同浓度的盐中形成沉淀。在半饱和硫酸铵溶液中，血清球蛋白会沉淀，经离心后，可与白蛋白分离开。 影响因素：PH、温度、蛋白质纯度等。 逐渐改变硫酸铵浓度可分段盐析出不同的蛋白。 操 作 一、盐析 －－ 白蛋白、γ球蛋白的粗分离 1 取0.5ml血清 2 取0.5ml饱和(NH４)２SO４溶液， 缓慢滴入，边加边摇。 3 混匀后于室温中放置10分钟。 4 8000r/min×10min 5 小心吸取上清液，作为纯化白蛋白用。 6 沉淀加0.5ml蒸馏水，使之溶解，作为纯化 γ