5种藻类金属硫蛋白的初步研究.pdfVIP

第 11 卷第 6 期 生 　物 　技 　术 Vol . 11 ,No . 6 　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　 2001 年 12 月 BIOTECHNOLOGY Dec ,2001 2 　结果与讨论 的同源性 ,而且 ,也为该酶基因的测序与克隆 打下必要的分子基础 。 21 　硫酸铵分级沉淀和离子交换色谱纯化 程序见表 1 。第 1 次 TOYOPEARL - DEAE650 3 　小结 ( ) M 弱阴离子交换色谱分出十几个峰 图 1a , 其中三个峰具有很好的 CMC 酶活力 ,作者重 本文报道了黑曲霉发酵酶粉中一个新的 点研究了第 1 个活性峰 ,对其进行进一步纯 内切β- 葡聚糖苷酶的分离纯化与表征 。以 ( ) 化 图 1b 、图2 。最后收 POROS 20PI 色谱的 60～90 %饱和度的硫酸铵分级沉淀粗酶液 ; 单一活性组分 PI 进行表征 。 再以2 次 DEAE - TOYOPEARL 650M 弱阴离 22 　纯度鉴定与分子量测定 : PI 经 SDS - 子交换色谱 ,在 p H 分别为 52 、50 ,不同Na ( ) PA GE 电泳 图3 检验为一条带 ,这表明所获 Cl 梯度下洗脱得一个酶组分 ;最后以 POROS 得的组分已达到电泳纯 。分子量测定采用 20 PI 高压液相色谱 ,在 p H51 的条件下纯化 ( ) SDS - PA GE 方法 图3 ,样品分两组 :加 DTT 出一个单一酶组分 。经表征分子量为 36kD , 和未加 DTT 。表明显示提纯的纤维素酶分子 还原条件下为 38kD ,最适 p H 55 ℃;N - 末段 量为 36kD ,加 DTT 处理后为 38kD ,这表明该 部分序列为 N - XXXFKCV GSMEDGAES ,经序 酶可能含有链内二硫键 。 列分析得该酶与报道的纯化并测序的酶蛋白 表 1 　内切β- 葡聚糖苷酶的纯化程序 不同 ,是一种新的内切β- 葡聚糖苷糖 。 总蛋白 总活力 比活力/ 纯 化 倍 纯化步骤 / mg / IU IU ·mg - 1 数/ fold 参考文献 : 粗酶液 162000 872000 538 -