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第 15卷 第 2期 生命 科 学研 究 V01．15 No．2
20I1年 4月 LifeScienceResearch Apr．201l
靶向CrkL基因的siRNA真核表达载体的构建及
对 H9C2心肌细胞凋亡的作用
朱炳豹，李 刚
(重庆医科大学附属第一医院 老年科 心血管病组 ，中同重庆 400016)
摘 要 ：为研 究C ，J基 因在心肌细胞 中的作 用机 制提 供 实验基础 ，首先体外合成 6个针对 大鼠CrL基 因的
特异反 义脱氧 寡核苷酸序 列 ，定 向克 隆至pSR—GFP／neosiRNA真核表达质粒 中，经双酶切 和测序 证 实重组载
体 pSR—GFP／neo-CrkLi构建成功．然后将 其转染入大 鼠H9C2心肌 细胞 内，用荧光 显微 镜观察其转 染率 ，RT—
PCR法鉴定其对 CrkLmRNA表达的抑制作用．流式细胞仪检测转染前后 H9C2细胞凋亡半．所有 pSR—GFP／
neo—C ，J栽体均 能高效率的转染 H9C2细胞 ．但 只有 3个载体 能显著抑制 C LmRNA 的表达．其 中pSR—
GFP／neo—CrkLi3效果最佳 ，其 转染 H9C2细胞后 ，该组 H9C2细胞 凋亡率 明显 高于其他 两组 (P=0．001)．
关键词 ：C L基 因：RNA干扰 ：心肌细胞 ；H9C2细胞株
中图分类号 ：Q786；R394．3 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—7847(2011)02—0l19一O6
ConstructionofEukaryoticsiRNA ExpressionVectorTargeting
C geneandItsEffectonAppoptosisinH9C2CellsofRat
Cardiomycytes
ZHU Bing—bao，LIGang
(Div~ionofCardiology，DepartmentofGeriatrics，TheP~rstAffiliatedHospital，ChongqingMedical University，Chongqing
400016．Chinn)
Abstract：To provide an experimentalbasisforstudyingCrkL gene action mechanism in Cardiomyocyte．
First，sixantisense0lig0de0xynucle0tide sequencestargetingrat’SCrkLmRNA weredesignedand synthe—
sizedinvitro，andthendirectionallyclonedintopSR—GFP／neosiRNA expressingplasmidrespectively．The
recombinantvectorspSR--GFP／neo—-CrkLiwereconstructed and identified successfullybydoublerestriction
endonucleasedigestionanalysisandDNA sequencing．ThepSR—GFP／neo—CrkLiweretransfeetedintoH9C2
celllineofratcardiomyocyte，andthetransfection efficiencywasevaluated with fluorescencemicroscope．
TheinhibitiveeffectsoftherecombinantsoilCrkL mRNA wereobservedbyRT-PCR． And the effectsof
CrkL geneon appoptosisofH9C2 cellswasd
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