流式细胞仪的原理及应用　课件.ppt

细胞凋亡 细胞膜分析-PS外翻（建议用于悬浮细胞） PS（磷脂酰丝氨酸）正常暴露在胞膜的内表面，凋亡时，PS外翻向细胞外表面。重组蛋白Annexin-V可与PS结合 Annexin V Assay/PI能够区分死亡与凋亡 Thank you for your attention! 正常人血液白细胞免疫表型散点图 正常人血液细胞免疫表型 T淋巴细胞：CD45++++、CD3+/CD4+、CD3+/CD8+、CD5+/CD7+，部分细胞CD（16+56）+，无CD4+CD8+双阳性细胞 B淋巴细胞：CD45++++、CD10-/CD19+、CD20+/CD22+、HLA-DR+/CD13- NK细胞：CD45++++ 、CD（16+56）+/CD3- 单核细胞：CD45+++、HLA-DR+/CD13+、CD14+/CD33+ 中性粒细胞：CD45++、HLA-DR-/CD13+、CD14-/CD33+，CD13比CD33表达更高 嗜酸性粒细胞：CD45+++、HLA-DR-/CD13+、CD14-/CD33+，CD13比CD33表达更高 正常人骨髓有核细胞免疫表型散点图 正常人骨髓细胞免疫表型 淋巴细胞:CD45++++、CD34-/CD38+、CD5+/CD7+（T淋巴细胞）；CD10-/CD19＋（B淋巴细胞） 单核细胞:CD45+++,CD34-/CD38+、HLA-DR+/CD13+、CD14+/CD33+、CD36+/GlyA- 粒系细胞: 原粒细胞CD45+、CD34+/CD38+、CD14-/CD33+、HLA-DR+/CD13+ 早幼粒细胞及其以下各阶段中性粒细胞：CD45++、CD34-/CD38+、CD14-/CD33+、HLA-DR-/CD13+，与原粒细胞或更幼稚细胞的表型有明显差异 巨核细胞：CD45++、CD41+/CD61+ 幼红细胞：CD45-、CD36+/GlyA+ AML免疫表型 急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）骨髓细胞免疫分型散点图 急性早幼粒细胞白血病（AML-M3）骨髓细胞免疫分型散点图 FCM在临床白血病分型中的作用 ▲能正确区别AML和ALL，并能进一步区别ALL中的T系和B系及亚型 ▲能正确鉴别AML中难于鉴别的M0、M6、M7 ▲诊断双系或双表型白血病 ▲发现仅表达个别次要非本系列相关抗原的白血病 ▲诊断少见疑难白血病（如HCL） 免疫分型 对下列情况具有重要意义 用形态学、细胞化学染色不能肯定细胞来源的白血病。 形态学为急性淋巴细胞白血病（ALL）或急性未分化白血病（AUL）但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记。 混合性白血病。 部分髓系白血病。目前，免疫分型对粒-单核细胞和单核细胞白血病的鉴别尚有一定困难。 慢性淋巴细胞白血病。 微小残留白血病。 阵发性血红蛋白尿(PNH) 阵发性血红蛋白尿是由于红细胞膜的获得性缺陷，对激活补体异常敏感的一种慢性血管内溶血 患者体内红细胞呈不均一性 利用流式细胞术和CD55和CD59单克隆抗体，对PNH患者红细胞、粒细胞和血小板进行分析，证实存在膜蛋白表达缺陷的血细胞，并计算缺陷细胞在全血中所占比例 阵发性血红蛋白尿PNH 正常人红细胞、粒细胞和血小板CD59表达完全阳性 PNH患者血细胞分为三型： Ⅰ型：CD59表达完全阳性，荧光强度与正常人阳性峰荧光强度接近 Ⅱ型：CD59表达部分阳性，荧光强度介于Ⅰ型与Ⅲ型之间 Ⅲ型：CD59表达完全阴性 分析PNH患者各型细胞所占百分比，评估疾病的严重程度 红细胞 —PNH分析 A 正常人 B –D 病人 造血干细胞计数 ?造血干细胞是一群有一定增生能力，可以多向分化的造血细胞。 ?造血干细胞的特征是： ?大小（FSC）和颗粒度（SSC）介于成熟淋巴细胞、大淋巴细胞相似 ?细胞内含有较多核酸物质 ? CD34表达弱阳性或强阳性 ? CD45表达弱阳性 ?在干细胞移植时需要做造血干细胞绝对计数 造血干细胞计数 血小板检测 血小板膜糖蛋白复合物诊断血小板缺陷性疾病 CD41-CD61复合物：血小板无力症 CD42a-CD42b 复合物：巨大血小板症 血小板活化的相关检查 血小板颗粒膜糖蛋白，如CD62，CD63 血小板膜糖蛋白活化表位，如PAC-1 血小板减少性疾病 血小板自身抗体检测 网织血小板的检测 血小板脱落微粒的检测 血小板活化 IIb/IIIa复合物（CD41/CD61）在所有静止和活化的血小板上都有表达 血小板活化时发生的改变 IIb/IIIa复合物发生变构，表达PAC-1 血小板内颗粒释放，分泌促进凝血反应的物质，这时表达CD62P CD61圈血小板门 PAC-1/?1：阴性对照，静止的血小板 PAC-1/CD62P：试验管，ADP刺激下活化的