高甘油三酯并高尿酸高血糖血症状态下丙酮酸激酶活性变化和蛋白表达.pdfVIP

高甘油三酯并高尿酸/ 高血糖血症状态下丙酮酸激酶 的活性变化和蛋白表达1 李慧，张冰，刘小青 北京中医药大学，北京（100029 ） E-mail ：zhangbing6@263.net 摘 要：目的 从血清、器官及蛋白不同水平，探讨丙酮酸激酶（PK ）与高甘油三酯并高 尿酸/ 高血糖代谢交互紊乱的病理联系。方法 通过喂饲高果糖食饵诱发大鼠高甘油三酯并 高尿酸/ 高血糖血症模型,用比色法测定动物血清、肝脏中PK活性,用免疫组化法显示肝脏中 PK的蛋白表达。结果 高甘油三酯并高尿酸/ 高血糖血症大鼠血清、肝脏中PK活性降低,肝 脏中PK蛋白表达明显减弱。结论 丙酮酸激酶与高甘油三酯血症状态下尿酸、糖代谢异常 发病之间有一定的病理联系。 关键词：丙酮酸激酶，高甘油三酯并高尿酸高血糖血症，蛋白表达 众所周知，高甘油三脂血症（HTG ）即Ⅳ型高脂蛋白血症是我国发病率较高的一类高脂 血症。近年来，随着我国人民膳食结构向高碳水化合物低脂肪饮食的转变，高甘油三脂血症 的发病率呈逐年上升的趋势。大量临床研究显示，HTG不仅可以伴发高尿酸血症，还可以引 发糖代谢异常，进一步加重冠心病、动脉硬化及糖尿病等疾病的发生，因此脂、尿酸、糖代 谢异常交互紊乱越来越引起人们的关注。目前对这种代谢紊乱疾病病理过程的认识尚无统一 的说法，相关的发病机理是现今代谢性疾病研究的热点之一。本研究在前期研究的基础上， 拟从在糖代谢过程中起重要作用，并调节糖酵解的三个限速酶之一的PK切入，观察高果糖 诱发高甘油三酯（TG ）并高尿酸（UA ）/高血糖（GLU ）血症状态下丙酮酸激酶（PK ）在 血清、肝脏活性变化及蛋白表达，对高TG血症引发UA 、GLU代谢异常疾病的发病机理作一 定的分析探讨。 1. 材料 1.1 动物 清洁级 SD 大鼠，雄性，体重 250±10 g 。由北京维通利华实验动物中心提供，动物合格 证号 SCXK （京）2002-2003 。 1.2 药物 D-果糖：AMRSESCO公司生产，批号12014/F09。 1.3 试剂 UA 检测试剂盒，批号 6412331 ；TG 检测试剂盒，批号 506051；GLU 检测试剂盒， 批号 512051，均为北京利德曼生化技术有限公司产品；丙酮酸激酶测试盒，批 南京建成生物工程研究所；兔抗鼠 PK 多克隆抗体（bs-0101R ），北京博奥森生物技术有限 公司，批号 D；二步法免疫组化检测试剂（PV-6001 ）,批号 085143，免疫组化 染色试剂盒（SP-9003），批号均为北京中杉金桥生物技术有限公司产品。 1本课题得到国家自然科学基金资助课题 ； 北京市自然科学基金资助课题(7052036) ；教育部博士 点基金 (No. 20040026005) 资助。 - 1 - 1.4 仪器 贝克曼CX4型全自动生化分析仪；恒温低速离心机,德国JOUAN 公司生产；恒温水浴箱, 北京医疗设备厂生产；液体快速混合器,江苏医疗器械厂生产；SHIMADZU UV-120-02紫外 可见分光光度计；电热恒温培养箱，上海医疗器械七厂生产； OLYMPUS U-ND25-2荧光显 微图像分析系统，Metamorph分析软件；SPOT II照相软件。 2. 方法 2.1 造模剂配方 参照国外文献方法配制(Hwang IS,1987) 。 2.2 实验分组与处理 SD 雄性大鼠 20 只，购入后在本实验室适应环境 3 d 后,按体重随机分为 2 组,正常组与 模型组各 10 只。正常组给予普通饲料，模型组给予含果糖的造模饲料，均自由饮水，不限 饮食，饲料和水每日更换 1 次，定时观察动物摄