高山红景天叶肉原生质体分离培养与植株再生.pptVIP

高山红景天 高山红景天： 为景天科红景天属多年生草本植物，是长白山珍稀药用植物之一，具有抗缺氧、抗寒冷、抗疲劳、抗微波辐射等显著功能。 一 材料和方法 1.材料 2. 原生质体分离： 取材：幼嫩叶片(长 0.5～3 ）切成宽1.0～2.0 mm 的条状 酶液配制：0.5 %～2 %纤维素酶 + 0.3 %～1 %果胶酶 + 10 mmol/ L CaCl2 ·2H2O + 0.1 %MES + 0.7 mmol/ L KH2 PO4 + 0.4～0.6mol/ L 甘露醇, p H = 5.8 酶解处理：以1 ∶10 的量将材料放入酶液。于25 ℃,黑暗条件下振荡酶解1～5h ,转速为80 r/ min 。 3.原生质体纯化： 酶解后的原生质体和酶混合液经250 目的尼龙网滤过后以800 r/ min 离心8min 沉降原生质体。向沉降的原生质体中再加入洗涤液和液体培养基各清洗1 次备用。 洗涤液：10mmol/ L CaCl2 ·2H2O + 0.1 % MES + 0.7mmol/ LKH2 PO4 + 0.4 mol/ L 甘露醇, p H = 5.8 液体培养基：1/ 2MS + 1 mg/ L 2 ,42D + 0.5 mg/ L Z