心脏连接蛋白43羧基末端相互作用蛋白酵母双杂交筛选.pdfVIP

心 脏 杂 志 (ChinHeartJ)2007，19(3) 心脏连接蛋 白43羧基末端相互作用蛋 白的酵母双杂交筛选 梁 庆 ，林吉进，李玉光 (汕头大学医学院第一附属医院心内科，广东 汕头515041) 摘要：目的 研究心脏连接蛋白43(Cx43)羧基末端与哪些心肌细胞内蛋白质存在相互作用。方法 ①通过PCR 方法得到编码心脏 Cx43羧基末端(AA235-382)的eDNA片段，并在其两端分别加上EcoRl和BamHI酶切位点，应 用EcoRI／BamHI酶切 PCR产物及pGBKT7空载体，凝胶分离后应用T4连接酶进行连接；②通过化学转化法将pC．- BKT7．Cx43．CT转化酵母菌AH109；③通过 “尿素／SDS”法从被转化的酵母菌中提取蛋 白质；④应用抗Cm·yc抗 体 ，通过Westernblot方法检测”诱饵”蛋白的表达(即Gal4一BD—Cm·yc—Cx43-CT融合蛋白)；⑤检测”诱饵”蛋 白自我 激活报告基因与否后 ，将已被 “诱饵