碳酸盐碱度胁迫下凡纳滨对虾基因差异表达.pdfVIP

中国水产科学 2012年 1月，19(1)：1-12 JournalofFisherySciencesofChina 研 究论 文 DoI：10．3724／SP．J．1118．2012．00001 碳酸盐碱度胁迫下凡纳滨对虾基因的差异表达 么宗利 1,2应成琦 ，周凯 ，王慧 ，来琦芳 1．中国水产科学研究院 东海水产研究所，中国水产科学研究院盐碱地渔业工程技术中心，上海 200090； 2．同济大学 环境科学与工程学院，污染物控制与资源化研究国家重点实验室，上海 200092 摘要：以广盐性养殖的凡纳滨对虾 itopenaeusvannamei)为研究对象，采用抑制消减杂交(suppressionsubtractive hybridization，SSH)和定量 PCR的方法，研究其在高碳酸盐碱度胁迫下转录组水平的基因表达差异，以期从基因组 水平研究对虾对高碳酸盐碱度胁迫的适应机制。结果表明，以高碳酸盐碱度(20mmol／L)胁迫第 4天凡纳滨对虾鳃 组织和低碱度 (2reotolL／)对照组鳃组织为材料，通过斑点杂交筛选，发现鳃组织 中有 158个克隆子表达上调，291个 克隆子表达下调。挑选 150个高表达差异的克隆子进行测序，获得 100个序列，其中50个得到成功注释。经过GO 分析，这些注释的差异基因主要分为8大类群，其中碳酸酐酶基因(c )、Na一K+-ATPase基因(A忆4一d)等与离子调控 相关的基因表达量上调，而溶菌酶基因等与先天免疫相关的基因表达量下调，这些结果表明高碳酸盐碱度胁迫下， 凡纳滨对虾以增加离子调控的方式进行酸碱平衡的调控，同时其免疫功能受到抑制 。此外，还对 CA和NKA一。【两个 基因在鳃和触角腺中的时空表达规律进行了研究，发现高碳酸盐碱度胁迫 9d过程 中，两个基因在鳃组织 中的表达 均呈现先高表达后回落的现象，而在触角腺中NKA．6c基 因则一直维持较高表达水平，说 明c，4和 NKA 基因在凡 纳滨对虾高碳酸盐碱度适应离子调控中起着关键作用，同时还发现除了鳃组织之外，触角腺同样参与了调控。本研 究从转录水平初步筛选 了高碳酸盐碱度胁迫下凡纳滨对虾 的表达差异基因，探索了凡纳滨对虾的耐盐碱机制，对 培育适于盐碱地水产养殖的优 良品种有着重要的意义。 关键词：凡纳滨对虾；高碳酸盐碱度；基因表达；SSH；定量 PCR 中图分类号：$961 文献标志码：A 文章编号：1005—8737一(2012)01—0001～12 中国拥有广袤的盐碱水资源，盐碱水环境的 导致对虾DNA损伤[4]、抗氧化酶基因表达上升 、 高碱度是制约水生生物生存 、生长的关键因子之 离子调控相关酶类l6】活性上升、耗氧率升高 】以及 一 。 碱度是指水中能与强酸发生中和作用的物质 SOD等免疫相关酶[]活性下降和抗病力下降 ]。 总量，包括HCO3一、CO32-等弱酸根，OH-等强碱以 高碳酸盐碱度与高 pH 不同之处在于，除了由于 及 NH3等弱碱性物质。一般水体的总碱度主要由 高 pH对生物造成的胁迫外，高 CO3 和HCO3|浓、 HCO3一、CO3 构成，称之为碳酸盐碱度。高碳酸 度也会影响水生动物的生存 ，、发育以及繁殖[加】， 盐碱度对中国明对虾(Fenneropenaeuschinensis)[1 研究碳酸盐碱度胁迫下对虾的基因表达差异，对 和凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei) 】具有较强 于更深一步了解盐碱水对养殖生物的胁迫机制具 的毒害作用。国内外相关的研究主要集中在 pH 有重要的意义。 胁迫下对虾生理、生化的响应[¨】。高 pH环境会 凡纳滨对虾俗称南美白对虾，是世界对虾养 收稿 日期：2011—06—23；修订 日期：2011-08—15． 基金项 目：农业部公益性行业科研专项资金项 (200903001—0502)；中央级公益性科研院所基本科研务费专项资金(中国水产 科学研究院东海水产研究所)资助项El(2007z03，2009M03)． 作者简介：么宗利(1978一)，男，博士研究生，助理研究员，研究方向为环境生物学 ． E-mail：zlyao@126．com 通信作者：来琦芳，研究员，硕士生导师．T