SARS冠状病毒RNA依赖的RNA聚合酶的原核和真核表达.pdfVIP

1974 JournalofHealth 18No10 中国卫牛检验杂志2008年lO月第18卷第lO期ChineseLaboratoryTechnology，Oct2008；Vol 【论著】 SARS冠状病毒RNA依赖的RNA聚合酶的原核和真核表达 张蕾，张海婧，段素素，赵艳，车昌燕，张云，王树蕙，刘力 (中国医学科学院基础医学研究所病原微生物学系，北京100005) [摘要】 目的：在大肠杆菌中表达和纯化重组RDRP蛋白，观察RDRP蛋白在293细胞中的表达及亚细胞定位。方法： pCMV—myc—RDRP瞬时转染293细胞，转染48h后免疫荧光染色，共聚焦显微镜观察蛋白表达及定位以及Western Blotting检测。结果：成功构建了表达RDRP融合蛋白的原核表达载体，并在大肠杆菌内高效表达，纯化后得到分子量约 为121 蛋白，为进一步探讨RDRP的功能奠定基础，在真核细胞中过表达的RDRP蛋白主要定位在细胞质。 [关键词] RNA依赖的RNA聚合酶；原核表达；真核表达；蛋白纯化 [中图