苦参碱对TIM2转基因小鼠肝癌细胞的作用研究.pdfVIP

维普资讯 第33卷第 10期 中 国 中 药 杂 志 Vo1．33，Issue 10 2008年5月 ChinaJournalofChineseMateriaM edica May，2008 苦参碱对 TIM2转基因小 鼠肝癌细胞的作用研究 马玲娣 ，张 彦 ，文世宏 ，何於娟 ，刘小珊。，康格非 ，蒋纪恺。} (1．南京医科大学 附属常州第二人民医院 q-心实验室，江苏 常州213003； 2．重庆医科大学检验系 临床生化教研室，重庆400016； 3．广东汕头大学 医学院分子生物学q-心，广东汕头515031) [摘要] 目的：观察苦参碱对TIM2转基因修饰小鼠H22肝癌细胞瘤苗的体内作用。方法：构建小鼠TIM2基 因真核表达载体并用 以转染 H22细胞 ，经体外稳定筛选后获得 TIM2转基因H22肝癌细胞全细胞瘤苗 (H22一 TIM2)，用以建立小鼠肝癌移植瘤模型，观察该瘤苗在小鼠体内的成瘤性和免疫原性；加用药物苦参碱 (matrine， M)治疗后，观察苦参碱对其体内抗癌活性的影响。结果：筛选得到的TIM2转基因H22肝癌细胞瘤苗有TIM2mR— NA及EGFP的稳定表达，此瘤苗接种后 ，在小鼠体内的成瘤率为41％，远低于H22对照组和H22一EGFP空载体组 (H22一EGFP)(后两者成瘤率在92％以上)，对小鼠肿瘤的抑制率为69．2％，明显高于苦参碱治疗组(67．5％)和其 他各组。同时苦参碱可进一步增强H22一TIM2瘤苗的肿瘤抑制率。H22-TIM2组小鼠的脾指数，CD4 T细胞亚群 和CD4／CD8较其他实验组明显增高。结论：TIM2基因修饰H22细胞瘤苗可显著降低 H22肝癌细胞在小鼠体内的 致瘤性，在体内具有一定的免疫原性，苦参碱可明显改善其体 内抗癌活性，为进一步研究TIM2基因在肿瘤免疫中 的作用及苦参碱的抗癌机制奠定了基础。 [关键词] TIM2基因；苦参碱；瘤苗；肿瘤免疫 ；小鼠H22肝癌细胞 [中图分类号]R285．5 [文献标识码]A [文章编号]1001-5302(2008)10—1175-05 苦参是我国传统的中药材之一，苦参碱是苦参中 兼用，重庆医科大学实验动物中心提供 [动物饲养 分离出的1种主要的生物碱成分，具有多种生理学活 许可证号SYXK(渝，中国人民解放军第 性…。笔者以往的研究证实，苦参碱对H22细胞建 三军医大学野战外科研究所实验动物研究 中心 立的荷肝癌小鼠肿瘤的生长具有显著的抑制效应，可 (SPF级动物实验室)代为饲养。 通过直接杀伤肿瘤细胞和诱导肿瘤细胞凋亡等机制 1．2 药物 G418购 自北方同正。苦参碱购 自陕西 发挥抗癌活性。然而实验中同时观察到苦参碱可一 省科学院西安植物园植物化学开发研究所，纯度 定程度上抑制机体的免疫功能 ．3J。为此，将小鼠的 99．9％ 。 一 种潜在的共刺激分子TIM2．小鼠T细胞免疫球蛋 1．3 仪器 上海天平仪器厂JA5003型 电子天平 ； 白域和黏蛋 白域蛋白分子 2基因(Tcellimmunoglob． 广州一途电子有限公司 YT一203型电子数显游标 ulindomainandmucindomainprotein2，TIM2)导人 卡尺；美国BeckonDickinson公司FACSCalibur流式 H22细胞中，对H22细胞进行外源性基因修饰 ．5J， 细胞仪 。 试图通过改变H22细胞表面分子的表达，达到增强抗 1．4 试剂 重组真核表达载体plRES2-EGFP-TIM2 肿瘤免疫应答的效应，同时观察苦参碱对TIM2基因 自行构建。菌株 DttSa及质粒 plRES2．EGFP本室 修饰H22细胞体内成瘤作用的影响，进一步探讨苦参 保存。真核转染试剂 LipofeetaminMT200