单头灰飞虱体内水稻条纹叶枯病毒快速检测.pdfVIP

植物学通报Chinese Bulletin of Botany 2008, 25 (4): 459464, w w w .chinbullbotany .com .技术与方法. 单头灰飞虱体内水稻条纹叶枯病毒的快速检测 1* 2 曲志才 , 沈大棱 1 曲阜师范大学生命科学学院, 曲阜 273165; 2 复旦大学遗传学研究所, 上海 2 00433 摘要 利用RT-PC R检测感病植株和单头带毒灰飞虱, 均扩增出水稻条纹叶枯病毒特有的一个长54 0 b p的片段, 且人工饲毒 虫的病毒含量高于自然感病稻田虫。以病毒S蛋白的多克隆抗血清, 采用We stern印迹技术从单虫体内检测到病毒抗原的2个 专一性条带, 大小分别为20.7和19.7 k Da 。DIBA (do t im mu nob indi ng a ss ay)检测法快速、简便, 但专一性和灵敏度不及 RT-PC R与We stern印迹检测。对不同检测方法所得昆虫带毒率差异的原因进行了探讨。 关键词 灰飞虱, 水稻条纹叶枯病毒, 病毒检测 曲志才, 沈大棱 (2008). 单头灰飞虱体内水稻条纹叶枯病毒的快速检测. 植物学通报25 , 4594 64 . 自20 世纪60 年代在江浙发现水稻条纹叶枯病(rice 近年来, 有报道以RSV外壳蛋白制备高特异性的单克隆 st ripe)以来, 至今该病在国内16 个省区均有发生, 已成 抗体, 通过E LISA 技术检测灰飞虱的带毒率(王贵珍等, 为我国分布最广的一种水稻病毒病(林奇英等, 1990) 。 2004 )。但RSV 单抗的制备比较繁琐, 技术要求高。胶 近年来, 该病在苏、鲁、豫、沪和浙等地发病严重, 乳凝聚测试是一种准确、可靠的血清学诊断方法, 但使 其危害程度呈逐年加重的趋势。2004 年仅江苏省就有 用该法突出的问题是某些昆虫匀浆物可能干扰抗血清的 数万公顷稻田绝收(任春梅等, 2007) 。病害的病原是水 胶乳凝聚作用(Omura et al ., 1984 )。PCR 技术已用于 稻条纹叶枯病毒(rice stripe virus , RSV), 由介体灰飞虱 植物材料的病毒检测, 特别是利用反转录- P CR (RT- (Laodelphax striat ellus)以持久方式经卵传给后代, 引起 PCR)检测一些含量较低的植物RNA 病毒, 其效果比 病毒病蔓延流行(Toriy ama , 1986)。介体的传毒活动虽 ELISA方法更好(Farinelli and Oliveira, 1996; Lopez et 然能引起病毒病蔓延流行, 然而介体的群体中并非都是 al . , 2003) 。 带毒者。由于自然种群的介体昆虫在传毒能力上是异 目前在介体昆虫体内检测RSV 的研究已有一些报 质性的, 同种介体中有些种群与病毒亲和, 有些种群与病 道(秦文胜等, 1994; Qu et al ., 1999; Cai et al. , 2003; 毒不亲和。因此, 介体的数量有时与病毒的流行并不呈 王贵珍等, 2004 )。本文利用改进的病毒RNA 提取方法, 直接作用关系, 而是与带毒的介体直接相关( 曲志才等, 以RSV 已知序列合成特异引物, 利用RT-PCR技术对水 2002) 。所以, 介体带毒的百分率是更为关注的流行因 稻植株及单头灰飞虱进行病毒检测; 用RSV致病专一蛋 素。在农业实践中, 要准确预测、预报水稻条纹叶枯 白(s tripe dis eas e-s pecific protein, S 蛋白)(Toriy ama, 病的发生, 不仅需要知道介体灰飞虱的数量, 同时还必须 1986)的抗血清, 通过斑点免疫